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【摘要】 目的 从遗传学角度探讨性反转综合征的发病机理及SRY基因在性别决定中的作用。方法 对性反转患者在常规染色体分析基础上，通过PCR扩增检测SRY基因。结果 46，XX男性扩增出SRY基因片段，46，XY女性SRY基因检测阴性。结论 SRY基因在性别决定中起重要作用。
关键词 性反转综合征 PCR SRY基因
对性发育异常的研究一直是生物学和医学中的重大课题。性反转综合征是临床上较常见的性发育异常，其主要特征是性腺性别与染色体性别不符，包括46，XX男性和46，XY女性两种类型。90年代SRY基因的发现为在分子水平上探讨性发育异常的发病机理，更准确地鉴定性别提供了依据。我们通过对46，XX男性和46，XY女性患者的SRY基因检测，从遗传学角度探讨性反转综合征的发生机理。
1 资料与方法
1.1 典型病例
例1，男，29岁，因不育就诊。查体:身高170cm，体重60kg，第二性征发育正常，双侧睾丸小于正常。精液检查无精子。睾酮测定2.397ng/ml。
例2，男，25岁，因不育就诊。查体:身高176cm，体重65kg，皮肤细嫩，有胡须及喉结，腋毛稀疏，双乳房呈正常男性型，阴茎长7.5cm，睾丸较小，左侧4ml，右侧6ml。精液检查无精子。睾酮测定2.08ng/ml。例3，女，34岁，因原发闭经、婚后不孕就诊。患者行人工周期能正常来月经，不用药无月经。查体:身高170cm，体重70kg，女性体型，无喉结、胡须，乳房发育大小如常，乳晕浅，乳头小，腋毛、阴毛稀少，阴道通畅，宫颈大小正常，子宫小，双附件区（—）。B超见子宫前位，约27cm×24cm×20mm大小，双侧卵巢未探及。
1.2 实验方法
1.2.1 染色体核型分析 外周血培养、染色体检查，包括染色体G显带、C显带等染色体核型分析均按常规方法进行。
1.2.2 外周血细胞DNA模板制备取肝素抗凝血10ml用2倍体积1×blood1ysis b buffer裂解红细胞，分离出白细胞经1×nucleic1ysis buffer和蛋白酶K处理，再以常规酚抽取法提取基因组DNA，用1×TE溶解DNA，置4℃保存。
1.2.3 SRY引物和PCR扩增 SRY引物序列P5′CATGA ACGCA TTGAT CGTGTGGTC3′和m5′CTGCG GGAAG CAAAC TGCAA TTCTT3′扩增片段的长度为254bp，PCR反应体积20μl，含MgCl21.5mmol四种dNTP各200μmol，单条引物60ng、模板DNA100ng，Taq酶1U反应液面以18μl石腊油覆盖。以93℃45s55℃45s72℃60s为一个循环周期，扩增35个周期，最后72℃延伸5min，PCR产物以EB染色的2%的琼脂糖凝电泳检测，紫外灯观察结果并照相记录。
2 结果
染色体核型:本组病例1为45，X;病例2为46，XX;病例3为46，XY。SRY检测:病例1、2为SRY阳性，病例3为阴性。
3 讨论
SRY基因是人类TDF的最佳候选基因。SRY基因是位于Y短臂上一个3.5kb的高度保守的单拷贝基因，编码80个氨基酸序列的核蛋白，SRY基因与特异的DNA序列结合，使胚胎向睾丸组织分化，若SRY基因本身发生突变或缺失都将引起性发育异常病变。
本文中例1和例2患者为男性无精症患者，核型分析是45，X和46，XX，临床诊断为男性性反转，发病率约1/20000。而PCR分析发现均有特异性SRY扩增条带，说明患者有SRY基因存在，提示可能是其父精子在第一次减数分裂时通过异常XpˉYp末端交换产生含有易位YpˉDNA的X配子 ［1，2］ 。一般认为易位DNA定位点为Xp22.3～pter，从而导致睾丸发育。
本研究中扩增出Yp1A1A区的SRY片段，为YpˉDNA易位假说提供了更进一步的证据，患者无精子形成，亦可推断性分化发育是一个十分复杂的过程，除SRY基因外，尚有其它基因与环节参与，当其中一个或多个发生突变时，性发育会受影响。 例3尽管核型为46，XY，但她没有男性性征，是女性性反转，其群体发病率约1/100000。对此患者经PCR分析发现SRY基因缺失突变，从而说明患者虽有Y染色体存在，但缺失SRY基因，因此胚胎发育成女性。目前认为造成缺失的原因是父方配子在减数分裂时，pˉYpDNA同源交换，Y梁色体包含SRY基因的YpˉDNA丢失，这样核型为46，XY的个 体就向女性方向发育 ［3，4］ 。这同上述46，XX男性易位学理论一致。总之，SRY基因在性别决定中可能起重要的中心作用。
参考文献
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4 刘智.七例46，XY女性的SRY基因分析.中华医学遗传学杂志，1995，12（5）:258ˉ261.
作者单位:050071河北石家庄河北省人民医院三优中心
（收稿日期:2004-07-23）
（编辑莫 茗）