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【摘要】 目的 探讨大鼠脑缺血后，其脑组织内皮素（ET-1）及降钙素基因相关肽(CGRP)含量的变化。方法 采用Pulsinelli 4-血管闭塞法的改良法制作脑缺血动物模型，用放射免疫法测定大鼠顶叶脑组织内皮素（ET-1）及降钙素基因相关肽(CGRP)的含量。结果 脑缺血后，大鼠脑组织内皮素（ET-1）的含量与对照组比较明显升高(P＜0.01)，而降钙素基因相关肽(CGRP)的含量与对照组比较明显减低(P＜0.05)。结论 脑缺血对大鼠脑组织内皮素及降钙素基因相关肽的含量有一定影响。
【关键词】 脑缺血；大鼠；脑组织；内皮素；降钙素基因相关肽
The change of endothelin-1 and calcitonin gene-related peptide in brain tissue of rats after ischemia brain damage
WANG Bo-ping,JIA Gang-rui.401th Hospital of PLA,Qingdao 266071,China
【Abstract】 Objective To study the change of endothelin-1 and calcitonin gene-related peptide content in brain tissue of rats after ischemia brain damage.Method The model of ischemia dementia in SD rats was established by 4-vessel occlusion and reperfusion of iterative ischemia brain.The change of endothelin-1 and calcitonin gene-related peptide content was determined by radioimmunoassay in brain tissue of ischemic rats.Results After ischemia brain damage,the endothelin-1 content of ischemia group was distinctively increase in ischemia group than control group(P＜0.01).The calcitonin gene-related peptide content of ischemia group was distinctively reduced in ischemia group than control group(P＜0.05).Conclusion The cerebral ischemia has a distinct influence on levels of endothelin-1 and calcitonin gene-related peptide of brain tissue in ischemic rats.
【Key words】 cerebral ischemia;rat;brain tissue;endothelin-1;calcitonin gene-related peptide
内皮素是由内皮细胞释放的一种血管收缩神经肽，广泛分布于中枢神经系统和血管内皮细胞中，具有收缩脑血管、调节脑血流等作用。降钙素基因相关肽(CGRP)是一种血管舒张神经肽。本实验旨在观察脑缺血后大鼠脑组织内皮素及降钙素基因相关肽含量的变化，探讨缺血性脑血管病的发病机制。
1 材料与方法
1.1 材料 成年健康雄性SD大鼠20只，体重250～300g，由河南医科大学动物实验室提供。将动物编号随机抓阄分为两组，每组10只，包括正常不缺血组(对照组)和缺血组。
1.2 动物模型制备 用0.5%氯胺酮(0.3ml/100g Wt.I.P）腹腔内注射。先头顶部正中切口，暴露第一颈椎横突翼小孔，用直径0.5mm电凝针插入每一侧翼小孔中，烧灼双侧椎动脉，造成永久性闭塞，缝合创口，避光保温饲养。24h后，再暴露双侧颈总动脉，用微动脉夹可逆性夹闭双侧颈总动脉5min，反复3次，每次间隔1h，恢复供血，缝合创口饲养。对照组手术步骤同上，但不做缺血处理。
1.3 脑组织内皮素（ET-1）及降钙素基因相关肽(CGRP)测定 快速断头取大鼠全脑，置沸生理盐水中煮5min后，分离大鼠顶叶脑皮质，称重后，移入含1N HAC 1ml的匀浆管内充分匀浆，室温搁置100min，再加入1ml 1N NaOH， 离心（3000r/min）20min，取上清液置入-80℃冰箱内保存待测。用放射性核素测定脑组织的内皮素（ET-1）及降钙素基因相关肽(CGRP)含量，试剂盒由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。
1.4 统计学方法 各项指标均采用（±s）表示，对两组动物各项数据进行方差分析判断差异程度。
2 结果
各组大鼠皮层脑组织ET-1及CGRP含量测定结果见表1。
表1 各组脑组织ET-1、CGRP含量的变化
注：与对照组比较，*P＜0.01，**P＜0.05
3 讨论
本实验采用Pulsinelli 4-血管闭塞法的改良法制作脑缺血动物模型［1］。实验表明：经过反复脑缺血后，缺血组大鼠ET-1含量增高，而CGRP含量减低，统计学处理差异有显著性。
ET-1是一种具有强烈血管收缩作用的肽类物质，它对于脑血管也有强烈的收缩作用，其主要分布于中枢及外周神经、心脏和血管等器官内。近年研究表明它在中枢神经系统起着神经调节因子的作用，具有一种旁分泌的功能，缺氧、缺血、酸中毒、炎症刺激可引起ET-1生成增加。CGRP是一种生物活性多肽，广泛分布于中枢神经系统和心血管系统，是体内最强的舒血管物质。CGRP具有增加脑血流量和神经保护双重功能，可减少大鼠短暂性全脑缺血脑组织神经元的凋亡/死亡，对缺血神经元具有保护作用。研究表明CGRP还参与到脑的高级神经活动，如记忆和认识［2］。动物实验表明，外源性CGRP能拮抗ET等血管收缩剂的作用，并能抑制脂质过氧化物形成，对缺氧缺血性损害具有显著的保护作用。本研究发现，大鼠反复脑缺血后，脑组织内ET-1含量升高，与对照组比较，差异有非常显著性（P＜0.01），此结果与有关文献报道一致［3，4］；脑组织内CGRP含量的减低，与对照组比较，差异有显著性（P＜0.05）。说明反复脑缺血后ET-1含量升高引起血管强烈收缩导致神经元缺血、坏死；而脑组织内CGRP含量的减少，难以对抗ET-1的升高，因此可以加重神经元缺血、坏死，产生病理改变。据国内有关文献报道，脑缺血后脑组织内CGRP水平显著高于对照组［5］，但是，也有研究发现脑缺血后脑组织内CGRP水平降低［6］，而本研究结果与后者基本相一致，导致实验结果不一致的原因可能与各自实验条件和选取的动物模型不同有关；也可能与脑缺血时间长短不一及选择动物脑组织部位不同进行测量有关，有待今后研究加以证实。
【参考文献】
1 Pulsinelli WA,Brierley JB.A new model of bilateral hemispheric ischemia in the unanaesthetized rat.Stroke,1979,10:267-271.
2 花放,方秀斌,张璐,等.降钙素基因相关肽对大鼠全脑缺血再灌注脑组织的保护作用.卒中与神经疾病，2002,9(6):331-334.
3 吴苏宁,梅元武,孙圣刚.Mg2+对脑缺血大鼠血浆及脑组织ET-1含量的影响.中风与神经疾病杂志，1999，16（1）：6-8.
4 吴卫平,李振洲,匡培根.脑缺血和再灌注后脑组织内皮素-1基因表达及丹参的影响.中国神经免疫学和神经病学杂志，1996，3（3）：137-141.
5 卢晓欣,洪新如,汤永建,等.高压氧治疗对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经肽Y1-36和降钙素基因相关肽含量的影响.中华航海医学与高气压医学杂志，2002，2：82-85.
6 张奇,李瑞林,李占魁,等.高压氧预处理对宫内缺氧缺血大鼠脑组织内皮素及降钙素基因相关肽含量的影响.河南医科大学学报，2001，36：297-299.
作者单位： 266071 山东青岛，解放军第401医院神经内科
(编辑：江 枫)