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冠心病是当今威胁人类健康的主要疾病之一，然而其发病机制迄今尚未完全阐明。vWF作为一种血小板激动剂，越来越多的研究提示其在血流状态下血栓形成过程中发挥关键作用。vWF在冠心病的发生、发展中的作用是不容忽视的，在冠心病的抗凝治疗和预后中可能具有指导意义。本研究应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术，对vWF与Ⅷ因子、血小板结合的功能域所对应的两个基因多态性进行分析，同时测定血浆vWF水平，调查冠心病经典危险因素，探讨vWF基因多态性、血浆水平和冠心病及其经典危险因素的关系。
1 对象与方法
1.1 研究对象 收集从2002年12月～2004年10月，本院心内科病房和冠心病监护病房的冠心病病例，包括心肌梗死和心绞痛两种类型，所选病例均符合WHO关于缺血性心脏病的命名和诊断标准。109例冠心病患者，年龄35～97岁，平均（64.77±9.38）岁，男60例，女49例，其中急性心肌梗死57例，心绞痛52例。104例正常对照选自健康体检者，经详细询问病史、体格检查、心电图、血尿常规和血生化检查均为正常，年龄45～85岁，平均（62.31±9.36）岁，其中男45例，女59例。两组年龄和性别构成差异无显著性（P＞0.05)。研究人群个体之间无血缘关系。
1.2 研究方法 将冠心病入选病例与健康对照者（冠心病患者本次发病入院24h内），采集清晨空腹静脉血1ml，注入抗凝离心管离心10min，收集上层液-20℃保存。用ELISA方法测定血浆中的vWF水平，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术，对vWF与Ⅷ因子、血小板结合的功能域所对应的两个基因多态性进行分析。参照WHO多国心血管病趋势和决定因素监测（MONIA）方案，设计冠心病调查表，详细记录每一病例的临床表现、生化检查、辅助检查和危险因素。
1.3 统计学方法 所有计量资料均以±s表示，所有数据分析用计算机完成，采用国际通用的SPSS，包括t检验，单因素方差分析等。
2 结果
2.1 循环vWF水平与冠心病的关系 健康对照组的循环vWF水平（117.01±55.52）%,而冠心病组为（185.07±80.57）%,两组相比差异有显著性（P=0.001）。
2.2 冠心病危险因素的多少与循环vWF水平的关系 见表1。
表1 冠心病危险因素的多少与循环vWF水平的关系 略
从表中可以看出合并的危险因素越多,则循环vWF水平越高。
2.3 健康对照组和冠心病组vWF基因的两个多态性频率 见表2，表3。
从表中可以看出，19内含子MspⅠ多态性基因型和等位基因频率，冠心病及其心肌梗死、心绞痛亚组基因型分布与健康对照组相比差异有显著性（P＜0.05),其中M-/M-频率分别为0.679、0.649和0.712，与M+/M+型、M+/M-型相比显著高于健康对照组（P＜0.05)。上述各组等位基因频率与正常人相比，差异均无显著性（P＞0.05）。18外显示RsaⅠ多态性基因型和和基因频率，冠心病及心肌梗死、心绞痛亚组基因型分布和等位基因频率与健康对照相比差异无显著性（P＞0.05)。
表2 对照组和冠心病组19内含子Msp Ⅰ基因型和等位基因频率 （略）
表3 对照组与冠心病组18外显子RsaⅠ多态性基因型和和基因频率 （略）
3 讨论
冠心病患者体内存在凝血活性增高和纤溶能力降低的病理状态。vWF在介导血小板活性、黏附、聚集和血栓形成中发挥重要的“桥梁”分子作用。本研究发现，冠心病患者的发病初期（24h内）循环vWF水平明显升高。据国外一项有3043例冠心病患者入选的研究结果表明，经冠脉病变程度和其他危险因子校正后，发生心肌梗死或心脏性猝死患者的vWF基线浓度明显高于未发生的患者，心绞痛患者循环vWF水平升高是发生急性冠脉事件的独立危险因子［1］。可以认为较高水平的vWF可能既是发生急性冠脉事件的原因，又是其发生发展的必然结果。
已经证实，高血压、糖尿病、高脂血症和吸烟等是冠心病的危险因素。本研究根据合并危险因素的多少，将冠心病患者分为高危组和低危组，结果显示合并的危险因素越多，循环vWF水平越高。可能的解释为：危险因素越多，对内皮的损害越大，发生急性冠脉事件的几率越高。药物可以干预的危险因素如高血压、糖尿病和高脂血症等，由于近年健康教育多，知晓率高，使冠心病患者对这些因素的认识相当充分，从而使行为因素影响（如吸烟等）未引起足够重视的问题凸显出来。
近来，在不同人群的研究发现，vWF基因的一些多态性可能与冠心病的发生、发展有关［2，3］。笔者的研究发现vWF基因19内含子MspⅠ酶切位点多态性可能是冠心病的一个遗传标志，其M-/M-基因型可能是冠心病包括心肌梗死和心绞痛的一个危险因素。在考虑何种基因型与循环vWF水平相关时，笔者可以认为M-/M-型可能通过升高vWF水平在冠心病的发生、发展中发挥作用。国外学者在研究vWF基因多态性与1型糖尿病的相关性时发现vWF基因18外显子RsaⅠ酶切位点多态性与冠心病的发生有关，且可能通过升高循环vWF水平得以实现［4］。在本研究中，此酶切位点多态性的各基因型在冠心病、对照组以及心肌梗死、心绞痛亚组的分布差异无显著性。
【参考文献】
1 Ruggeri Zm.vWF QS a target for antithrombotic Intervetion.Circula-tion,1992,86:Ⅲ26-29.
2 Corinne L,Christne G,Catherine D,et al.Association between hign von willebrand factor levels and the Thr 789 Ala vWF gene polgmorphism but not with nephropathy in type Ⅰ diabetes.Kidney International，2000,57:143-144.
3 Mercier B,Gaucher C,Mazurier.An Msp I Polymorphism in the von willebrnd factor gene.Nucleic Acids Res，1990,18:7467.
4 Kunkel GR,Graham JB,Fowlkes Dm，et al.Rsa I Polymorphism in von wiuebrand foctor(vWF) at codon 789.Nucleic Acids Res,1990,18:4961.
作者单位：1 266400 山东胶南，胶南市人民医院
2 上海，上海市第九人民医院
(编辑：邹 晔)