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【摘要】 目的 观察抗酸染色中温度因素对痰涂片阳性检出率的影响。方法 比较不加热染色方法与经典萋-尼染色法之间的差异性。结果 不加热染色20min以上痰涂片阳性检出率与经典萋-尼染色法之间差异无显著性。结论 温度变化观察可为基层痰检的染色工作提供参考。
【关键词】 抗酸染色；温度；检出率
Influence of temperature on positive rate of acid resistance dyeing in mycobacteria
WANG Xian,WU Cui,YUAN Li.
Laboratory of Xinjiang Endemic and Ethinc Disease,Shihezi University,Shihezi 832002,China
【Abstract】 Objective To observe the effect of temperature on the positive rate of acid resistance dyes.Methods We compared the difference beween the no heating method and the classics method.Results The results demonstrated that no heating dyeing time above 20 minutes had no significant difference to the classics method.Conclusion This could provide the reference to stain of sputum smear in the countryside work.
【Key words】 acid-fast staining;temperature;positive rate
痰涂片检查在肺结核的诊断方面具有重要意义。《中国结核病防治规划实施工作指南》［1］（以下简称《指南》）中采用的是萋-尼染色法（Ziehl-Neelsen），因其成本低、操作简单且无需专门仪器设备，在结核病的监测、检测工作中，担负着重要作用。在基层检验单位，因痰检工作量大、痰检人员又相对缺少，而未能严格按照指南进行染色的情况时有发生。为此，我们观察了初染中不加热常温染色对痰菌检出的影响，并与经典萋-尼染色法的染色结果进行了实验比较，现将实验结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 收集痰菌阳性的门诊病人的清晨痰液，共40份。
1.2 方法
1.2.1 涂片 每份痰液按照《指南》，制备痰涂片18张，自然干燥、火焰固定涂片后进行染色。5%石炭酸复红初染，分别做如下分组：（1）加热组：加温染色3min；（2）常温组：不加热（即室温）染色5、10、15、20、40min；然后脱色，至无红色脱下为止，复染。每组3张。
1.2.2 结果判断 在油镜下观察，结果记录及报告均按《指南》进行。同一份标本以3张中阳性等级最高的记录为准。阳性判断方法：+：3~9条抗酸杆菌/300个视野：++：1~9条抗酸杆菌/10个视野；+++：1~9条抗酸杆菌/每个视野：++++：≥10条抗酸杆菌/每个视野。
2 结果
2.1 阳性检出率 40份阳性标本，加温染色的检出率为100%，常温染色随着染色时间的不同检出率不尽相同。其阳性检出率见表1。
表1 不同染色时间阳性检出率（略）
2.2 不同染色时间下涂阳痰片镜检结果比较 不同染色时间下涂阳痰片镜检结果（见表2），通过统计学分析（由于样本小，采用秩和检验），加热3min与常温5、10、15min组之间差异存在显著性，P值分别为0.0079、0.0498、0.0404。而与常温染色20、40min组比较，P值分别为0.8201、0.8208。
表2 不同染色时间痰片镜检结果比较（略）
3 讨论
以上试验结果显示，经典的萋-尼染色法，不论从检出率还是检出效果上都是最佳的。但是，在加温过程中，也存在一些不利因素：（1）不易控制：稍有不慎，易造成染液溅起，或边缘出现染液干涸，影响痰片质量；（2）加温产生的气溶胶对人体有害。基于此，常温染色有一定优越性。
从常温染色的结果观察，染色20min以上，基本可以达到加温染色的效果。延长时间，在检出率及菌量上与加温染色差异无显著性。在基层工作中，由于痰检工作量大，偶尔会出现忘记加温的现象，那么在不重复劳动、不增加工作量的情况下，可以考虑通过延长染色时间达到染色效果。
结核杆菌的染色存在很多改良的方法［2~4］，但是从结核病控项目整体目标考虑，在基层工作中，选择经济、简易、方便、效果好的染色方法便于执行和统一检查标准。在基层高度紧张的痰检工作中，各种事件都可能发生，按照规程的操作是最标准的，但是有时候也会存在一些疏忽，对于弥补工作中的失误，减少因失误造成的工作压力，采用常温染色20min，对结果不会产生明显影响。由于本次试验的观察样本较少，但可为工作提供一定的思路，有待于大样本量的进一步验证。
【参考文献】
1 中国结核病控制项目办公室.中国结核病防治规划实施工作指南，2005，12-13.
2 钱小毛.结核分枝杆菌染色时加温因素对菌量检出影响的探讨.中国防痨杂志，1998，20（2）：103.
3 任远贵.结核杆菌冷染色法与加温染色法比较观察.四川省卫生管理干部学院学报，2003，22（1）：27.
4 Kochhar A. Evaluation of a two step AFB cold staining method and simplified concentration technique for diagnosis of pulmonary tuberculosis. J Commun Dis,2002,34(4):276-80.
（编辑：江 宇）
作者单位： 832002 新疆石河子，石河子大学医学院新疆地方与民族高发病实验室（△病原生物学与免疫学教研室）
835200 新疆伊犁，霍城县卫生防疫站