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【摘要】 目的 研究OKY-046·Na抗血小板聚集作用。方法 选用新西兰兔进行体内外抗血小板聚集作用研究。结果 OKY-046·Na可明显降低新西兰兔体外及体内血小板聚集率。结论 OKY-046·Na具有抗血小板聚集的作用。
【关键词】 OKY-046·Na;抗血小板聚集;新西兰兔
OKY-046·Na是一种作用强、选择性高的血栓素合成酶(TXA2)抑制剂，其作用机制是有效地阻断血栓素合成酶(TXA2)的生成，同时促进前列环素合成酶(PGI2)的产生，从而升高PGI2/TXA2的比值;同时OKY-046·Na在临床上已有用于治疗冠心病心绞痛的报道，但对其在心血管方面的药理作用国内外文献鲜有报道。因此，本文对OKY-046·Na抗血小板聚集进行了药效学研究，为其在心血管疾病治疗方面的临床应用提供了基础实验研究依据。
1 实验材料
1.1 药品 OKY-046·Na(非无菌性原料药)：海南碧凯药业公司(批号：020816);硝酸甘油：上海第一制药厂(批号：20020701);肝素钠注射液：南京新天生物化学有限公司， 批号：011206;ADP(二磷酸腺苷钠)：上海伯奥生物科技有限公司，批号：20010302;枸橼酸钠(Sodium citrate)：生养化学试剂厂， 批号：200004016;pH7.4 磷酸缓冲溶液：自行配制;氯化钠注射液(0.9%)：沈阳志鹰制药厂，批号:02110601。
1.2 仪器 BS634血小板聚集测定仪：北京生化仪器厂。
1.3 动物 新西兰兔，体重1.5～2kg，广东省医学实验动物中心，雌雄兼用。
2 方法
2.1 OKY-046·Na体外给药对ADP诱导的新西兰兔血小板聚集功能的影响 取新西兰种大白兔8只，雌雄各半。耳缘静脉取血2.7ml，置事先放有0.3ml的0.38%枸橼酸钠溶液(抗凝剂，血与抗凝剂比例9：1)的塑料管中，将血液与抗凝剂轻轻混匀，离心(800rpm)5min，吸出上层米黄色悬液PRP(富血小板血浆)。然后再离心(2000rpm)10min，吸出上清液PPP(贫血小板血浆)备用。OKY系列药液用生理盐水配制，用等比稀释法配成0.1、0.3、0.9mg/ml的药液。将BS634血小板聚集测定仪预热30min待机器指示“GOOD”后，用微量移液管取PRP 200μl加20μl的待测药物(对照用同体积的生理盐水)，于37℃预温10min，用PPP加20μl的相应的药液或对照液调节调节器透光度为100%，再在搅拌作用下加入100μl的诱导剂ADP，测定10min内药物对ADP(以pH7.2的磷酸缓冲液配成1mmol/L)诱导血小板聚集的影响。
2.2 OKY-046·Na体内给药对ADP诱导的新西兰兔血小板聚集功能的影响 取新西兰种大白兔40只，雌雄各半，随机分为5组，每组8只，分别为空白对照组，OKY低、中、高三个剂量组及阿司匹林阳性对照组。分别耳缘静脉注射生理盐水、OKY-046·Na(4、12、36mg/kg)及阿司匹林(5mg/kg)，2 min后耳缘静脉取血2.7ml，置事先放有0.3ml的0.38%枸橼酸钠溶液(抗凝剂，血与抗凝剂比例9：1)的塑料管中，将血液与抗凝剂轻轻混匀，离心(800rpm)5min，吸出上层米黄色悬液PRP(富血小板血浆)。然后再离心(2000rpm)10min，吸出上清液PPP(贫血小板血浆)。测定药物对ADP(以pH 7.2的磷酸缓冲液配成1mmol/L)诱导血小板聚集的影响。
3 试验结果
OKY-046·Na体内外给药对ADP诱导的新西兰兔血小板聚集功能的影响结果表明：由表1及表2可以看出无论是体内或是体外，OKY-046·Na均具有明显的抗新西兰兔血小板聚集作用，与阴性对照组比较差异有显著性，而且与剂量成正相关，其中在体内抗血小板聚集试验中，中剂量及高剂量组的抗血小板聚集作用强于Asp组。表1 OKY-046·Na对新西兰兔体外血小板聚集的影响表2 OKY-046·Na对新西兰兔体内血小板聚集的影响 注:与空白对照比较,**P<0.01，***P<0.001
4 讨论与结论
血管壁内皮细胞生成的PGI2及血小板内的TXA2，在预防动脉粥样硬化的发生及防止机体内血栓的形成中起着生理调节作用。血小板在聚集时释放的血栓球蛋白，干扰PGI2的合成。动脉内壁损伤时，血小板粘附在受损的血管壁局部，并释放出PGG3和PGH2，在血小板微粒体中TXA2合成酶的作用下转化生成TXA2，从而引起血小板聚集和血管收缩。当血管壁的内膜下层暴露时，该局部合成PGI2功能完全消失，从而导致动脉粥样硬化形成。血小板聚集发生这种病变部位在冠状动脉时，释放出来的TXA2可促使这些血管痉挛产生缺血、供氧不足等情况，诱发心绞痛、心肌梗死甚至是心律失常等严重后果，所以动脉血管内壁的受损，不仅造成PGI2合成减少或缺失，同时也失去抗血小板聚集和扩张血管的效应。本研究结果表明：OKY-046·Na可显著抑制ADP诱导的新西兰兔血小板聚集， 提示血栓素合成酶抑制剂OKY-046·Na具有抗血小板聚集作用，在心血管疾病治疗方面具有一定的应用价值。