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［摘要］ 目的 研究KAI-1在不同分期、分级、预后和年龄组肾细胞癌中的表达，分析其表达的意义。方法 随访1991～2000年入院治疗并留取病理标本的肾癌病例预后。根据临床分期、细胞分级、年龄、T1-3aN0M0病例是否术后转移分别将肾癌病例分组，应用免疫组织化学方法检测肾癌标本KAI-1表达，卡方检验分析KAI-1表达的差异。结果 30～70岁每十年龄段KAI-1阴性表达率为34.4%～47.8%，比较低表达率χ2值为0.54～1.19，P均>0.05，过表达率χ2值为0.84～1.84，P均>0.05。肾癌TNMⅠ～Ⅳ期KAI-1阴性表达率为34.2%、25.2%、54.4%和80.0％，Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ期间过表达比较P<0.05。Fuhrman分级Ⅰ～Ⅲ级KAI-1阴性表达率为33.0%、47.8%、81.4%，Ⅱ和Ⅲ、Ⅰ和Ⅲ级比较χ2值分别为9.11、27.24，P均<0.01。T1-3aN0M0术后转移组24例和未转移组194例KAI-1阴性表达率为79.2％、9.8％；两组低表达率比较χ2值＝64.49，P<0.01；过表达χ2值＝0.02，P>0.05。结论 转移抑制基因KAI-1在肾癌中的表达与年龄因素无关。KAI-1低表达或表达缺失率在Ⅲ期、Ⅳ期和Fuhrman Ⅲ级肾癌中最高。KAI-1基因缺失可能参与了T1-3aN0M0肾癌术后转移的发生，检测KAI-1表达具有临床预后指导价值。
［关键词］ 肾细胞；癌；KAI-1；转移抑制基因
Expression of metastases suppressor gene KAI-1 on renal cell carcinoma and its significance
ZHANG Lu-fang，PAN Dong-liang，PENG Xue-ye,et al.Department of Urology，Shandong People’s Hospital，Weifang 261042，China
［Abstract］ Objective To study the expression of metastases suppressor gene KAI-1 on renal cell carcinoma（RCC) and analyze its significance.Methods The patients with RCC undergoing surgical operations from 1991 to 2000 were followed up and their prognoses were written down.Then these patients were divided into different groups according to their clinical stages，tumour cell gradation，age of patient and whether postoperative metastasis of T1-3aN0M0 stage patients occurred or not.The expression of KAI-1 on RCC lesions were testified with immunohistochemistry and the outcomes of expression were analyzed by χ2 testing.Results The differences of KAI-1 expression every decades among ages of 30~70 were not statistically significant.Nevertheless，the negative expression rates of KAI-1 from TNM Ⅰto Ⅳ stage were 34.2%，25.2%，54.4% and 80.0％ individually，and the statistically significant differences of KAI-1 overexpression between Ⅰand Ⅲ and Ⅳ stage（P<0.05).The negative expression between Fuhrman G1 and G3，G2 and G3 were compared separately and the χ2 scores were 9.11，27.24（P<0.01).Twenty four cases with postoperative metastasis and 194 cases without postoperative metastasis in patients of T1-3aN0M0 stage were found out by follow-up.The low expression rate of KAI-1 in metastasis group was higher than that of no metastasis group（P<0.01).Conclusion There is statistically significant correlation between the expression of metastases suppressor gene KAI-1 on RCC and the factor of patient age.The low or negative expression rates of KAI-1 were higher in TNM stage Ⅲ and Ⅳ，Fuhrman G3 than other groups.KAI-1 gene missing maybe participated in the procedure of postoperative metastasis of T1-3aN0M0 stage patients and so to test
the expression of KAI-1 would help predict the prognoses of these patients.
［Key words］ renal cell carcinoma;metastases suppressor gene;KAI-1
1991～2000年北京朝阳医院泌尿外科经手术治疗肾细胞癌269例，显示意外瘤为67.3％（181/269），T1-3aN0M0期肾癌行肾癌手术后达到5年临床治愈标准的为90.0%（217/241），但是仍有24例在术后（4.25±3.5）年出现转移，推测可能在手术前已发生微转移。到目前为止尚缺乏预测肾癌转移的标记物，故本试验拟检测转移抑制基因KAI-1在肾癌中的表达和意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 269例患者中，男169例，女100例；年龄19～81岁，平均47.1岁。16例有肾囊肿病史1～18年，平均6.2年。体检发现肿瘤181例。均行超声、腹部CT、胸片检查。93例行肾动脉造影：其中57例行病侧肾动脉栓塞。手术：242例行肾癌根治术；肾部分切除术21例；同侧肾上腺切除术101例；淋巴结清扫术10例。5例分别因为合并慢性白血病和肺转移、81岁患者并严重冠心病、广泛肺转移、下腔静脉瘤栓并家属拒绝手术、多发骨转移和脑转移放弃肾癌切除手术，仅行穿刺活检术。40例术中发现肿大淋巴结：淋巴结转移癌6例，阳性淋巴结7个。术后TNM分期：Ⅰ期120例，Ⅱ期132例，Ⅲ期12例，Ⅳ期5例。Fuhrman分级：Ⅰ级97例，Ⅱ级113例，Ⅲ级59例。随访和预后：随访5～14年，平均6.5年。失访35例，失访率13％。未手术的5例均于3年内死亡。T1-3aN0M0肾癌241例行肾癌手术后24例在术后（4.25±3.5）年出现转移。TNMⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期病例术后5年、10年的存活率分别是100％（120/120）、81％（107/132）、41.7％（5/12）、0和76.9％（20/26）、60.7％（17/28）、0、0，5年和10年总存活率分别是86.2％（232/269）、60.7％（37/61）。
1.2 实验材料 实验标本均取自上述病例的肾癌灶，为我院病理科存档蜡块。4％甲醛固定，石蜡包埋切片。
1.3 方法
1.3.1 分组 根据临床分期、细胞分级、年龄、T1-3aN0M0病例是否术后转移分别将肾癌标本分组。
1.3.2 免疫组织化学染色 采用Power Vision二步法检测KAI-1蛋白表达，具体步骤按照说明书进行。KAI-1一抗（sc-17752，鼠抗人）购自美国Santa Cruz公司，二抗（PV6002，山羊抗鼠）购自美国Power Vision公司。
1.3.3 对照 用已知阳性片作阳性对照，用缓冲液代替一抗作阴性对照。
1.4 结果判断 以胞浆、细胞膜出现棕黄色颗粒为KAI-1蛋白阳性染色的判断标准。高倍镜（×400）下选择10个有代表性的视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，计算阳性细胞百分比。肿瘤细胞相应部位不着色或阳性细胞数<5％为阴性（0）；5％～50％为弱阳性（1+）；>50％为强阳性（2+）。所有染色结果均经病理科医生3次重复观察。
1.5 统计学方法 设KAI-1染色结果≤1+为低表达，2+为过表达。数据采用均数±标准差（x±s)表示。采用χ2检验，P<0.05为差异有显著性。应用SPSS 11.5 软件对数据进行统计学分析。
2 结果
2.1 KAI-1表达与年龄的关系 如表1所示，60～69岁、40～49岁、50～59岁三组年龄段肾癌发病率最高，分别为32.7％、22.7％、22.7％。由于30岁以下和80岁以上年龄段病例数达不到统计学最小样本量，故不进行比较。30～70岁各年龄段KAI-1阴性表达率为34.4%～47.8%，1+表达率为36.0%～39.8%，2+表达率为13.1%～26.3%。各年龄段间低表达比较χ2值为0.54～1.19，P均>0.05。过表达比较χ2值为0.84～1.84，P均>0.05。
2.2 KAI-1表达与肾癌分期的关系 如表2所示，随着肾癌TNM分期的增高，各期KAI-1阴性表达率为34.2%、25.5%、52.3%和80.0％；1+表达率为40.8%、46.1%、35.7%和20.0%，2+表达率为25.0%、28.4%、11.9%和0。各期KAI-1低表达比较χ2值为0～1.19，P均>0.05。Ⅳ期与其余各期间KAI-1过表达比较χ2值为∝，P均<0.01；Ⅰ和Ⅲ期间过表达比较χ2值＝4.87，P<0.05；其余各期间比较P均>0.05。表1 269例肾癌不同年龄组KAI-1表达表2 269例肾癌不同分期、细胞分级、是否术后转移组KAI-1表达
2.3 KAI-1表达与肾癌细胞分级的关系 随着肾癌细胞Fuhrman分级的增高，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各级KAI-1阴性表达率为33.0%、47.8%、81.4%；1+表达率为35.1%、27.4%、17.0%；2+表达率为31.9%、24.8%、1.6%。各级间KAI-1低表达比较χ2值为0.04～0.7，P均>0.05。KAI-1过表达比较，Ⅰ和Ⅱ级间χ2值＝1.43，P>0.05；Ⅱ和Ⅲ、Ⅰ和Ⅲ级比较χ2值分别为9.11、27.24，P均<0.01。
2.4 T1-3aN0M0肾癌是否术后转移组别间KAI-1表达的差异 通过随访得知241例T1-3aN0M0肾癌中，转移24例，未转移194例，失访23例。转移组和未转移组间比较，KAI-1阴性表达率为79.2％、9.8％；1+表达率为16.7％、16.5％；2+表达率为4.1％、73.7％。两组低表达比较χ2值＝64.49，P<0.01；过表达χ2值＝0.02，P>0.05。
3 讨论
KAI-1基因是一个具有2.4 kb的肿瘤转移抑制基因，编码白细胞表面糖蛋白，主要参与调控细胞黏附，使肿瘤细胞不易脱离原发灶而抑制转移。在人类多种正常组织中表达，特别以前列腺、肾、肝、肺、骨髓和胎盘表达最高，而且研究显示KAI-1低表达与前列腺癌转移关系密切［1］。到目前为止，未见KAI-1在大样本量肾癌中表达的系统研究，特别是缺乏KAI-1在T1-3aN0M0肾癌术后迟发转移中的作用和价值探讨。
本组结果显示各年龄组间KAI-1低表达和过表达比较差异均无统计学意义，说明KAI-1并未随着肾癌病例年龄的增长而出现差异性表达，提示年龄因素与KAI-1在肾癌中的表达无相关性。
随着肾癌TNM分期的增高，本组病例KAI-1阳性表达率逐渐下降。Ⅰ和Ⅱ期病例1+、2+阳性表达率最高，Ⅳ期阳性表达率最低；但是Ⅳ期KAI-1阴性表达率最高。通过统计学方法比较，Ⅰ期过表达率最高，至Ⅲ期、Ⅳ期过表达率降低，各组之间差异均具有统计学意义；但是Ⅰ和Ⅱ期之间比较不具有统计学意义。提示具有局部浸润或转移特点的Ⅲ期、Ⅳ期肾癌的发生可能与KAI-1基因的低表达或表达缺失有关，即KAI-1表达缺失的肾癌更易向高期演进和发展。
肿瘤细胞分化已证实是肾癌独立的预后因素，分化越差则预后越差［2］。那么在研究本组病例与KAI-1基因表达的关系时发现：Ⅰ和Ⅱ级分化之间KAI-1各种表达率的比较不存在相关性，但是Ⅰ和Ⅱ级分别与Ⅲ级比较KAI-1过表达率时存在统计学意义，即Ⅲ级分化肾癌KAI-1过表达率显著降低，说明Ⅲ级分化肾癌中KAI-1低表达或表达缺失发生率最高。此外，KAI-1低表达或表达缺失是否影响到肾癌细胞的分化程度，尚需进一步研究。
迄今尚缺乏预测T1-3aN0M0肾癌术后转移的标记物和方法。通过比较T1-3aN0M0肾癌中24例术后转移和194例未转移病例原发灶KAI-1表达发现，转移组KAI-1表达缺失率显著高于未转移组，即使低表达率差异亦具有统计学意义；而过表达率差异无显著性。说明T1-3aN0M0肾癌术后转移的发生与KAI-1表达缺失显著相关，提示KAI-1基因缺失参与了T1-3aN0M0肾癌术后转移，即肾癌微转移的发生；也说明KAI-1表达具有临床预后指导价值，KAI-1表达缺失的T1-3aN0M0肾癌术后转移的可能性大，应对此类病例在肾癌术后加强随访。
［参考文献］
1 Dong JT，Lamb PW，Rinker-Schaeffer CW，et al.KAI-1，a metastasis suppressor gene for prostate cancer on human chromosome11p11.2.Science（Washington DC),1995，267:884.
2 Arie B，Jean BD.Renal tumors.In Patrick CW，Alan BR，Darracott EV,et al.Campbells,Urology，7th ed. Beijing:Science Press,2001,2305.
作者单位： 1 261042 山东潍坊，潍坊市人民医院泌尿外科
2 100043 北京，首都医科大学附属北京朝阳医院（京西院区）泌尿外科
（编辑：陈 沁)