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【摘要】 有90%以上的强直性脊柱炎病人中携带HLA-B27，因此，实验室开展HLA-B27检查对帮助临床上诊断强直性脊柱炎有重要意义。
【关键词】 HLA-B27;强直性脊柱炎
强直性脊柱炎(As)是一种慢性进行性炎性疾病，主要侵犯骶髋关节、脊柱骨突(滑膜关节)、脊柱旁软组织及外周关节，并可伴发关节外表现。血清中人类白细胞抗原HLA-B27阳性与强直性脊柱炎有很强的相关性，据国内甘晓丹统计资料报道[1]，有90%以上的强直性脊柱炎病人中携带HLA-B27，因此，实验室开展HLA-B27检查对帮助临床上诊断强直性脊柱炎有重要意义。本医院为全国大型中医骨伤科专科医院，强直性脊柱炎患者相对较多，2006年10月—2009年3月期间，共对845例强直性脊柱炎(经临床确诊)患者进行了HLA-B27测定，以协助临床上对强直性脊柱炎进行诊断和鉴别诊断，取得了满意的效果，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 实验对象 2006年10月—2009年3月，经临床上确诊的强直性脊柱炎患者845例，其中住院患者465例，门诊患者380例。男549例，占64.7%;女296例，占35.3%。
1.2 实验器材 1μl连续式微量加样枪、雷勃尔离心机、Olympus双目显微镜、普通或低温冰箱、水浴箱、一次性吸管、试管、离心管、试管架等。试剂(1)HLA-B27反应板。(2)新鲜补体，直接使用。冻干补体，需加蒸馏水复溶后使用。(3)染色液。
1.3 实验方法 微量细胞毒法。
1.3.1 抽血 抽取静脉血2ml，用肝素或EDTA抗凝，离体血放置时间不应超过24h。
1.3.2 分离细胞 无菌抽取淋巴细胞分离液2ml于另一试管。用盐水将全血稍稀释混匀后，用吸管吸出并轻铺于分离液表面，让吸管靠近液面，将血轻轻挤出，勿破坏界面，加血2ml即可。加完后，2500转/min离心10～15min。见中间有一白膜层出现，即为淋巴细胞层，用吸管轻轻吸出，应尽量避免吸到红细胞，吸出的淋巴细胞放于另一试管。
1.3.3 洗涤细胞 在吸出的淋巴细胞中加盐水5ml轻轻混匀，1000转/min再离心2min。
1.3.4 调细胞浓度 倒净上清液，管口用纸沾净，留沉淀细胞，加生理盐水5滴左右，调细胞浓度为1000～2000个/μl(肉眼观察，细胞悬液稍微有一些浑浊即可)。
1.3.5 加细胞 取HLA-B27反应板复温几分钟，将调好浓度的淋巴细胞悬液加于各反应孔中，每孔加1μl，按从阴性对照到检测孔，再到阳性对照孔的顺序加样，一定要使加出的细胞与反应孔中间的液珠混合。加完后，放在30℃左右水浴箱中孵育10min。
1.3.6 加补体 取出补体，室温融化后，加于各反应孔，每孔5μl，按照从阴性对照到检测孔，再到阳性对照孔的顺序加样，补体也应与中间的液珠混合。加完后室温(25℃左右)孵育30min。
1.3.7 加染液各孔加染色液5μl 放置几分钟后镜下判读结果，如果孔中内容物较多，可用玻片或棉签将凸出部分刮去再看。选取低倍视野，将光源调至最大，光圈调至最小，镜对准反应孔，反复转动微调至最佳位置进行观察。活细胞：体积小、发亮、折光性好、立体感强。死细胞：体积胀大，模糊，发暗，无折光性，无立体感。阴性对照应全为活细胞，阳性对照应全为死细胞，四个检测孔只要有两个孔死细胞数超过50%，即可报告HLA-B27抗原阳性。
2 实验结果
在测定的845例标本中，HLA-B27阳性666例，占78.8%，其中强阳性469例，弱阳性197例;HLA-B27阴性179例，占21.2%。
3 讨论
3.1 HLA-B27与强直性脊柱炎的相关性 尽管HLA-B27与强直性脊柱炎有很强的相关性，但并非绝对相关，仍不能说阳性就可确诊为强直脊柱炎 对已确诊的强直性脊柱炎患者我们上述的实验结果是HLA-B27阳性率为78.8%，与有关资料报道的90%以上的阳性率比较偏低，另有资料报道[1]人群中HLA-B27阳性者仅有0.95%～9.5%患强直性脊柱炎(阳性预示值)，而HLA-B27阴性未患强直性脊柱炎约99.9%(阴性预示值)，因此，尽管HLA-B27实验对于强直性脊柱炎患者具有高度敏感性及特异性，但仍不可用于诊断随机选择的患者是否患有强直性脊柱炎。用于疑似强直性脊柱炎患者的实验室检查较为恰当。在测定的845例标本中，HLA-B27阴性占21.2%。亦有人研究报道[2]HLA-B27阴性组的严重的髋关节病变、窦缓和/或传导阻滞、合并类风湿性关节炎及其他合并症(颈椎病、骨关节炎、腰椎间盘突出症等)的比较均明显低于HLA-B27阳性组。疾病活动性指标如血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)在HLA-27阴性组中明显低于HLA-B27阳性组。
3.2 目前对强直性脊柱炎的诊断 参考采用两个标准，1984年修订的美国纽约标准[1]和1988年4月全国中西医结合风湿疾病会议制定的昆明标准[3] 以两骶髂关节、腰背部反复疼痛为症状，关节僵直，胸廓活动受限为体征，加之X线检查和实验室检查四个方面。实验室检查项目为：HLA-B27测定、ESR和RF。纽约标准没有实验室检查项目的考虑，1988年的国内昆明会议标准，制定有实验室检查项目，尤其是HLA-B27测定，笔者认为对强直性脊柱炎的诊断很有必要。
3.3 HLA-B27测定在鉴别诊断方面的作用 强直性脊柱炎与其他一些血清阴性脊柱炎关节病如赖特综合征、反应性关节炎、银屑病关节炎、肠病关节炎、幼年强直性脊柱炎等存在某些交叉重叠征象[4]，相互鉴别诊断见表1。表1 血清阴性脊柱关节炎的不同特点比较
强直性脊柱炎的特点是HLA-27阳性率在90%以上，测定的结果阳性率在78.8%以上，强直性脊柱炎的特点：HLA-B27阳性，发病方式缓、有对称性，一般不表现尿道炎。
3.4 测定HLA-B27的实验过程中，应注意以下几个问题 (1)反应板必须低温冷冻，最好一次性使用，不要反复复融。(2)细胞的浓度一定要准确，1000～2000个/μl。这一点很重要。(3)补体复融后立即使用，即补体加前再复融。(4)若有多份标本，应清洗加样枪针管两次或更换枪头，以避免交叉污染。否则会造成一些假的弱阳性出现。(5)在加署红时，应按“s”形加样。(6)应保持工作环境温度的稳定(室温)。否则，会影响到实验结果的准确性。
【参考文献】
1 施桂英，栗战国.关节炎概要.北京：中国医学科技出版社，2000：38-40;126-128;676-677.
2 王丽，王昌.HLA-B27对强直性脊柱炎的诊断价值.检验医学与临床，2006;4(1)：5-6.
3 孙翠华，孟凡杰，王玉芳，等.强直性脊柱炎与HLA-B27相关性的研究.医学综述，2007;13(4)：15-16.
4 王娜，刘玉珂，李少侠，等.HLA-B27检测对强直性脊柱炎的诊断价值.河南科技大学学报(医学版)，2006;4：10-11.