骨康注射液对骨痂中的BMP含量影响的研究

　　骨折是临床骨科创伤常见病之一，目前研究开发加速骨折愈合的方法越来越多，以往采用中药口服和外用，虽能加速骨折愈合，但口服吸收慢，利用率低，外用则有过敏及副反应的出现。过去从中药复方的研究较多，且取得了一定的进展，但其药味多，有效成分的提取及机制研究较困难，且未有一种中药针剂的产生，目前市场上仅有一种生物制剂骨折刺激素（金葡液）是针对骨折局部针剂的用药。所以，我们对中药九节茶、丹参及其复方先从口服应用到将其制成针剂，现就其骨痂中的BMP含量分析实验与金葡液对比观察如下。

　　1 材料与方法
    
　　1.1 一般资料 选用新西兰雄性大白兔44只，体重2～3kg。在无菌条件及静脉麻醉下，暴露左桡骨中下1/3处，用自制铁锯将其横断，造成0.3～0.8cm缺损的标准骨折模型。术后随机分为二组即骨康注射液组（由九节茶、丹参组成，为黑龙江中医药大学附属医院制品）与金葡组（金葡液，长春高斯达制药厂生产），并分别于术后1、2、3、4、5周对两组模兔进行断颈处死后观察对比（其中每组每期4只，另4只是正常组）。
   
　　1.2 方法 骨痂中的BMP含量分析:采用免疫组化法，将两组模兔于用药后1、2、3、4、5周取10%福尔马林液固定后再用5%EDTA液脱钙10～15天，冲洗、切块、石蜡包埋，之后采用免疫组化BMP染色（滴加工作溶液1%BMP第一抗体细胞抗BMP单克隆抗体，是由第四军医大学口腔医院病理科提供），之后再滴加即用苏木素溶液复染、水洗、风干后AEC封固剂封片。待用彩色图像分析仪进行含量分析。

　　2 结果
    
　　正常骨组织BMP-MCAB染色基本阴转，骨痂染色为阳性，BMP主要沉积在功能活跃的成骨细胞内及其周围和新生骨小染边缘，纤维骨痂中含量较少，成骨组织及软骨组织中均为阴性。在骨折的1、2、3周骨痂局部BMP含量逐渐减少，第1、2周中药组明显高于对照组（P<0.01），中药组BMP高峰出现在2周，而对照组出现在第3周。
　　表1 骨痂中BMP平均光密度值 （略）

　　注:正常组与骨康组、金葡组比较， △ P<0.05， △△ <0.01， △△△ P<0.001;骨康组与金葡组比较，** P<0.01， *** P<0.001。 

　　表2 骨痂中BMP平均积分光密度值 （略）
   
　　注:正常组织BMP平均积分光密度值:0.0013±0.00084;正常组与骨康组、金葡组比较， ** P<0.01， * P<0.05

　　3 讨论
    
　　祖国医学认为:“骨折后血离筋脉，瘀积不散，使经络受阻，经脉涩滞，血循障碍”。《辨证录》中指出:“血不适则骨不能接”，“瘀不去则骨不能接”。则骨折局部的血液循环与骨折愈合的关系越来越被重视。通过观察得知:该剂能促使骨折断端BMP的形成快且数量明显优于对照组7天，明显优于对照组（P<0.05）。并能改善血管壁的通透性，加快血液循环，有利于离子交换与小骨梁的改建和再吸收，把更多钙动员出来，其骨折愈合也就越快。中医学认为要想加速骨折愈合，接骨续筋不可少。经许多研究表明，胶原是骨组织重要的组成部分，因胶原其主要成分是蛋白，而氨基酸是合成蛋白的基础。因而在活血化瘀的基础上，使血容量增加，保证了合成胶原所必需的氨基酸的供给，激活了成纤维细胞、成骨细胞、成软骨细胞的活性，也使骨生成细胞在数量上及分布部位上均增加。这些细胞除了存在于骨外膜骨痂及桥梁骨痂外，还可在连接骨痂和近端的封闭骨痂内看到。经实验观察得知:在骨痂中BMP平均积分光密度值变化明显优于对照组（P<0.01）。从而亦证明该剂不但能活血化瘀，还能增加胶原的合成。该剂符合加速骨折愈合的两个必要条件，即加速血运与激发细胞的活力。本研究通过采用真彩色图像系统分析BMP平均积分光密度值的实验结果。从而从分子生物学水平证明骨康注射液加速骨愈合的机制。

　　作者单位:310005浙江中医学院附属新华医院
   
　　　　　　　150086哈尔滨医科大学附属第二医院中医科