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Study on quality standard of anti-ngu dropping pill Ruan Hongsheng Life Science and Technology College，HLJ August First Land Reclamation University，Hei Longjiang，Daqing163319.
【Abstract】 Objective To establish the quality standard method of anti-ngu dropping pill.Methods The quality standards of the pills were established.The Phellodendron Chinese schneid，Cnidium monnieri cuss and Sophoˉra flavescens vit were identified by TLC，the quantity of berberine hydrochloride was analyzed by HPLC.Results and Conclusion This method is simple and the results is reliable. Key words Anti-ngu dropping pill quality standard TLC HPLC
抗非淋滴丸由黄柏、苦参、蛇床子等药物组成，具有清热解毒、利水通淋止痛的功效，用于湿注下焦引起的尿道炎、宫颈炎等性传播疾病。为有效地控制产品质量，保证临床用药效果，本实验采用薄层色谱法鉴别黄柏、蛇床子、苦参，采用高效液相色谱法测定抗非淋滴丸中君药黄柏有效成分盐酸小檗碱的含量。结果表明，该方法简便、快速、重现性好。
1 仪器与试药
日本岛津SCL-10A高效液相色谱仪，LC-10AS高压泵，SPD-10A紫外检测器，C-R6A色谱数据处理机，TU-1201紫外可见分光光度计，十万分之一电子天平（瑞士），KQ3200超声仪（昆山市超声仪器有限公司）。盐酸小檗碱对照品、蛇床子素对照品、蛇床子对照药材、苦参对照药材（中国药品生物制品检定所），硅胶G（青岛海洋化工厂），乙腈色谱纯（天津四友试剂厂）。其他试剂为分析纯;抗非淋滴丸由黑龙江省中医研究院制剂室提供。
2 定性鉴别
2.1 黄柏鉴别 取本品20丸，加甲醇25ml，超声15min，滤过，滤液补足至5ml作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。同法制成缺少黄柏的阴性对照液。吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（15:6:2:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品相应位置上，显相同的黄色荧光斑点。
2.2 蛇床子的鉴别 取本品20丸，加乙醇10ml，超声处理30min，上清液作为供试品溶液。另取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。同法制成缺少蛇床子的阴性对照液。吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品相应位置上，显相同的蓝色荧光斑点。
2.3 苦参鉴别 取本品20粒，加氯仿25ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml氯仿使溶解，作为供试品溶液，另取苦参对照药材1g同法制成对照药材溶液。同法制成缺少苦参的阴性对照液。吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-苯-氨水（4:3:2:0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品相应位置上，显相同的橙色斑点。
3 盐酸小檗碱含量测定
3.1 最大吸收波长的选择 精密吸取盐酸小檗碱（0.20mg/ml）对照品溶液1ml，置10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，用紫外可见分光光度计，从200～400nm全波长扫描，盐酸小檗碱最大吸收波长为348nm。
3.2 色谱条件 ［1～3］ 色谱柱:YMC-C 18 柱（4.6mm×150mm×5μm，大连依利特科学仪器有限公司）;柱温:室温;流动相:0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲液-乙腈（7:3）;流速为1ml/min;检测波长:348nm;进样量:10μl。
3.3 标准曲线制备 精密称取盐酸小檗碱对照品10mg置50ml量瓶中，加50%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。从上述溶液中依次精密吸取2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ml，分别置于25ml量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取上述对照品溶液10μl注入液相色谱仪中，按上述条件测定峰面积。以对照品溶液微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得一条直线，计算回归方程Y=384103.8x-25351.3，r=0.9999。结果表明盐酸小檗碱在0.16～0.80μg范围内呈良好线性关系（附标准曲线测定数据，见表1）。表1 盐酸小檗碱标准曲线测定
3.4 空白溶液的制备 按处方中药味的比例，配成不含黄柏的药群，按其工艺制成阴性对照，再按供试品溶液制备方法制备缺黄柏的阴性对照溶液，吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，依法测定，结果阴性对照液与盐酸小檗碱对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。
3.5 精密度试验 对于同一盐酸小檗碱对照品溶液（0.2 mg/ml），进样5次，测得峰面积积分值RSD=0.26%（n=5）。
3.6 重现性试验 对于同一批供试品，分5次取样，每次精密称取30mg样品，测定盐酸小檗碱含量，RSD=1.70%（n=5）。
3.7 供试品溶液的制备及测定 取本品20粒精密称定，研细，精密称取细粉25.90mg（相当于一丸重量），置于具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25ml，超声处理60min，放冷，微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。分别吸取对照品及供试品液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值，计算含量。结果见表2。 表2 抗非淋滴丸中盐酸小檗碱的含量测定（略）
3.8 稳定性试验 对于同一批供试品溶液，按含量测定方法，连续6次进样，每次间隔2h，测定小檗碱含量，RSD=0.35%（n=5）。
3.9 回收率试验 采用加样回收法试验。取已知含量的样品，分别添加盐酸小檗碱对照品，按上述色谱条件测定， 计算回收率，结果见表3。平均回收率为99.22%，RSD为1.49%（n=5）。表3 加样回收率测定结果 （略）根据以上试验数据，认为本方法简便、准确、可靠，可以作为含量测定的质量标准。
4 讨论
4.1 通过反复试验研究，最后确定了薄层色谱鉴别方法，该方法灵敏度高，专属性强，斑点显色明显，测试结果易于观察判断。
4.2 含量测定供试品溶液制备方法中，提取方法以50%乙醇超声60min为最佳。流动相选择了甲醇-乙腈-0.02 mol/L磷酸溶液（10:28:62）和0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液（pH=3.0）-乙腈（7:3）和0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液（pH=4.0）-乙腈-十二烷基磺酸钠溶液（55:45:0.2，ml/ml/g），但从分离效果看0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液（pH=3.0）-乙腈（7:3）优于另两个流动相的分离效果。
参考文献
1 孟令杰.反相高效液相色谱法测定黄连中成药小檗碱、黄连碱和巴马汀的含量.中成药，1989，11（12）:11.
2 王俊秋.消渴愈糖胶囊含量测定方法研究.中国现代应用药学杂志，1998，4（15）:48.
3 卢萍.黄连愈伤组织的诱导及小檗碱和药根碱的含量测定.药物分析杂志，1998，18（2）:101.
作者单位:163319黑龙江八一农垦大学生命科技学院