复方苦黄糖浆质量标准的研究

　　【摘要】 目的  建立复方苦黄糖浆（大黄、苦参）的质量标准。 方法  采用薄层色谱法鉴别大黄、苦参;用HPLC法对制剂中的大黄主要成分大黄素、大黄酚进行定量分析;分析柱Lichrospher（C 18 ，粒径5μm，4.6mm×150mm），流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）;流速0.8ml/min，检测波长254nm。 结果  大黄素在0.5～4.0μg范围内线性关系良好，平均回收率98.98%（n=5），RSD为1.34%。大黄酚在0.2～3.5μg范围内线性关系良好，平均回收率98.71%（n=5）;RSD为1.97%。 结论  本方法简单、准确、重现性好，可有效控制制剂的质量。
    
　　      
　　【Abstract】 Objective Establish the standard of Kuhuang Complex syrups。Methods TLC method was used to identify the drugs of Rhuhard、kuheng and HPLC method was used to determinate the contents of Emodin and Chryso-phanol.The chromatography condition were:Lichrospher colomn（C 18 ，5μm，4.6mm×150mm）;The mobile phase consisting of CH 3 OH-0.1%H 3 PO 4 （85:15）;The flow rate was0.8ml/min，Detection wavelength was254nm.Re-sults The linear range of Emodin was within0.5～4.0ug，the average recovery of Emodin was98.98%（n=5），RSD was1.32%.Conclusion The methods was simple，accurate and reliable，and it was effective to control the quality of preparation.
   
　　Key words kuhuang complex syrups standard emodin kuheng TLC HPLC
      
　　复方苦黄糖浆是我院根据中医验方自制的制剂，由大黄、苦参、栀子、苍术、防己、冬葵子等组成。具有清热泻火、燥湿解毒作用。临床主要用于急性黄疸重症肝炎，疗效确切。在《常州市医院制剂规程》中，本制剂只进行相对密度的检查，为提高制剂质量标准，适应形势的发展，本实验对处方中主要药味大黄、苦参、栀子进行了鉴别，并以HPLC法测定了其中大黄主要成分大黄素、大黄酚的含量。为控制产品质量提供了一个分离度高、灵敏、准确有效的方法。

　　1 仪器与试药
    
　　1.1 仪器 Water-510高效液相色谱仪，ubers-486紫外检测器，紫外荧光仪（宜兴市和桥科静仪器厂），分析天平（上海市第二天平仪器厂）。

   　 1.2 试药 大黄素对照品（中国药品生物制品检定所批号0756-200110）、大黄酚对照品（中国药品生物制品检定所批号796-200107）、苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所批号805-200005）、栀子对照品（中国药品生物制品检定所批号0749-9605）、复方苦黄糖浆（常州市第三人民医院制剂室提供批号031201、040226、040312）;处方药材由镇江药材公司提供，经鉴定为正品。蒸馏水（本院药剂科提供批号040412）。甲醇为色谱级，其它所用试剂均为分析纯。
    
　　2 方法和结果
    
　　薄层色谱鉴别

   　2.1 大黄 取样品5ml，加水10ml稀释，加盐酸1ml，直火加热30min，放冷，用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚提取液，再用5%氢氧化钠溶液萃取，直至萃取完全，弃去乙醚溶液，氢氧化钠溶液层用盐酸调至pH=3，继续用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚提取液，水浴蒸干，残渣用1ml甲醇溶解，作为供试品溶液。取组方中除大黄以外的其它药材，按成方比例及制备方法制备成阴性对照液。另取大黄素、大黄酚各1mg，混合后用1ml甲醇溶解，作为对照品溶液。吸取样品溶液、阴性对照液及对照品溶液各约10μl，点样于同一硅胶G板上，以氯仿-乙酸乙酯（8∶2）为展开剂展开，取出，晾干，在紫外光下检视（λ=365nm），样品色谱图中与对照品色谱相应的位置上，显相同的2个黄色荧光斑点;置氨气中熏后，日光下观察，斑点变为红色。而阴性对照液无此斑点。（见图1）。
 
　　图1 大黄的TLC图谱1.大黄素、大黄酚2.样品3.阴性对照略
    
　　2.2 苦参 取样品5ml，用盐酸调pH=3，振摇数分钟，用乙醚提取3次，每次20ml，弃去乙醚提取液，水溶液用碳酸氢钠调pH=10，继续用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚提取液，水浴蒸干，残渣用1ml甲醇溶解，作为供试品溶液。取组方中除苦参以外的其它药材，按成方比例及制备方法制备成阴性对照液。另取苦参碱对照品1mg，用1ml甲醇溶解，作为对照品溶液。吸取样品溶液、阴性对照液及对照品溶液各10μl，点样于同一硅胶G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水（2∶4∶2∶1）的上层溶液为展开剂展开，取出，晾干。依次喷以碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液。在与对照品色谱相应位置上，显相同的灰蓝色斑点。而阴性对照液无此斑点（见图2）。
 
　　图2 苦参TLC图谱 1.苦参碱2.样品3.阴性对照略
    
　　2.3 栀子 取本品5ml，水浴蒸至近干，加丙酮适量超声使溶解，上清液作为样品溶液。取组方中除栀子以外的其它药材，按成方比例及制备方法制备成阴性对照液。另取栀 子苷对照品1mg用丙酮1ml溶解，作为对照品溶液。吸取样品溶液、阴性对照液及对照品溶液各10μl，点样于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶1）为展开剂展开，取出，晾干。喷以5%香草醛硫酸溶液。在与对照品色谱相应位置上，显相同的灰蓝色斑点。而阴性对照液无此斑点（见图3）。
 
　　图3 栀子的TLC图谱1.对照品2.样品3.阴性对照略
    
　　3 大黄中大黄素和大黄酚的含量测定参照《中国药典》2000年版一部

    　3.1 色谱条件 色谱柱waters Lichrospher C 18 （4.6mm×150mm）流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15），流速0.8ml/min，检测波长254nm。

  　  3.2 样品液的制备 取复方苦黄糖浆5ml，边振摇边加入无水乙醇30ml，去沉淀，继续加无水乙醇至50ml，超声混匀，过滤，滤液水浴蒸干，残留物加水溶解后用氯仿提取至完全，挥去氯仿，以甲醇溶解并定容至10ml，即得。

   　 3.3 标准溶液的制备 精密称取干燥至恒重的大黄素、大黄酚对照品各2mg，分别置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准品溶液（200μg/ml）。

   　 3.4 标准曲线的绘制 精密吸取标准溶液2.5μl，5.0μl，10μl，15μl，20μl，30μl，分别进样，以峰面积为纵坐标（Y），进样量为横坐标（X），进行线性回归，得大黄素的回归方程:Y=128.4910X+470.9892（r=0.9991），线性范围:0.5～4.0ug。大黄酚的回归方程为Y=0.1783X-0.0026（r=0.9997），线性范围:0.2～3.5μg.

    　3.5 回收率试验 采用加样回收试验，取同批样品6份，每份5ml，1份作随行样品，于其余5份中加入一定量对照品，按样品液制备的方法提取测定，计算回收率。结果见表1。

　　表1 回收率试验结果（略）

　　3.6 取样品液10μl进样，按标准曲线项（3.3）方法测定峰面积，计算样品浓度，结果见表2。
    
　　表2 样品溶液大黄素含量（略）

    　4 讨论
    
　　4.1 大黄、苦参药材中的主要成分有明显的酸碱性，实验中采用多次酸碱萃取的方法，提取分离效果明显。

   　 4.2 本制剂为糖浆剂，为避免糖分对大黄素含量测定产生影响，先用醇沉法将样品中大量糖分沉淀除去，再以氯仿提取，挥去氯仿以甲醇溶解，实验效果显著。

   　 4.3 复方苦黄糖浆为纯中药制剂，活性成分多。本文以大黄中大黄素、大黄酚为质量控制标准，实验方法可靠，操作简单，结果准确。     

　　作者单位:213001江苏省常州市第三人民医院药剂科