黄芪四君汤对脾虚大鼠血清细胞因子水平的影响

　　【摘要】 目的  观察黄芪四君汤对实验性脾虚证大鼠血清细胞因子的影响，探讨脾虚证与细胞因子的关系及脏腑相关的意义。 方法  选用SD大鼠，3月龄，普通级。随机分为对照组（n=10），脾虚模型组（n=12），黄芪四君汤组（n=12），采用大黄复制脾虚证动物模型，分别给予生理盐水、大黄、黄芪四君汤煎液灌胃。测定各组大鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素2（IL-2）水平的变化，以及各组动物造模前后体重和脾、胸腺、睾丸、肝、肾脏组织重量比值的改变。 结果  脾虚模型组大鼠血清TNF、IL-6、IL-2含量均比正常对照组显著降低，差异有显著性（P均<0.01）。黄芪四君汤能明显升高TNF、IL-2含量，与脾虚模型组比较，差异有显著性（P均<0.01），而IL-6含量有所升高，但差异无显著性;并使体重增加，脾脏和胸腺重量比值增大，肾脏重量减轻。 结论  脾虚证的发生与细胞因子网络调节系统的失衡有关，而黄芪四君汤对实验性脾虚证有较好的防治作用，通过补气健脾调节细胞因子的水平，从而达到增强免疫功能的作用。
      
　      
　　Influence of huang qi si jun zi tang on serum cytokine levels
    
　　in rats models with spleen deficiency syndrome
     
　　Chen Zhixi，Zhou Minglu，Xu Yanshen，et al.
   
　　Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，The First Affiliated Hospital，Guangzhou510405.   
     
　　【Abstract】 Objective To investigate effect of huang qi si jun zi tang on serum cytokine levels in experimertal rats with spleen deficiency syndrome and the possible relationship between spleen and kidney functions.Methods 3months old male SD rats were randomized into3groups:control group（n=10），spleen deficiency model（n=12），huang qi si jun zi tang（n=12）.The model rats of spleen deficiency syndrome were established by gavage with rhubarb preparations.Serum tumor necrosis factor（TNF），interleukin-6（IL-6）and interleukin-2（IL-2）levels were measured.Results The levels of TNF and IL-2in the spleen deficiency models were significantly lower（P<0.01）than the normal control group.After treatment with the huang qi si jun zi tang，the levels of TNF and IL-2in the spleen deficitency models were significantly risen（P<0.01）than the spleen deficiency models group.The levels of IL-6were risen.After treatment，the body weight，and the weight ratio thymus and spleen increased，but the kidney weight decreased.Conclusion The results indicated that the development of spleen deficiency syndrome may relate to imbalance of cytokine regulation system.The huang qi si jun zi tang have good effects on experimental spleen deficien-cy syndrome.Through regulating the levels of cytokine，it can improve the immunological function.
     
　　【Key words】 spleen deficiency syndrome huang qi si jun zi tang tumor necrosis factor interleukin-6 interleukin-2
      
　　脾虚证见于临床诸多疾病，黄芪四君汤是补气健脾之代表方，对脾虚患者有较好的防治作用 ［1］ 。为进一步了解该方的作用机制，本实验采用大黄复制脾虚动物模型，观察黄芪四君汤对脾虚大鼠血清肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素2（IL-2）水平的变化，探讨脾虚证与细胞因子的关系及脏腑相关的意义。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料

    　1.1.1 动物 选用SD大鼠，雄性，体重190～230g，3月龄，普通级，由中山大学实验动物中心提供，动物合格证号为2001A032。

   　 1.1.2 药物 黄芪四君汤由黄芪、党参、白术、茯苓、炙甘草等组成，由广州中医药大学第一附属医院中药房提供，按2:2:2:2:1的比例煎制成1kg/L（100%）水煎剂，存放4℃冰箱备用。大黄为市售大黄，按1:10加沸水煮沸，沸后小火继续加热煮20min，趁热过滤，滤液在恒温水浴箱中（60～70℃）浓缩至2kg/L，此为大黄后下煎剂，存放4℃冰箱备用。

   　 1.1.3 试剂 TNF、IL-6、IL-2放射免疫试剂盒由北京东雅生物技术研究所提供。

   　 1.1.4 测量仪器 上海原子核研究所日环仪器一厂SN-695B型智能放免γ测量仪。

    　1.2 方法

　　1.2.1 脾虚大鼠模型的复制 动物模型的复制参照文献 ［2，3］ ，稍作修改。将34只大鼠随机分为3组，每组10～12只。各组分别依次为:（1）正常对照组（n=10）:每天用等量生理盐水灌胃，2次/d，2ml/次，连续16天;（2）脾虚模型组（n=12）:用大黄后下煎剂灌胃，2次/d，2ml/次，连续8天。从第9天开始，上午灌大黄后下煎剂2ml，下午灌生理盐水2ml，连续8天;（3）黄芪四君汤组（n=12）:方法同脾虚模型组，从第9天下午开始灌胃黄芪四君汤煎液2ml/次，1次/天，连续用药8天。
   
　　1.2.2 观察指标及方法 各组动物于最后1次给药后1h从眼球取血，观察各组大鼠血清中TNF、IL-6、IL-2水平的变化。采用放射免疫分析法，严格按试剂盒说明书要求并由专人进行操作，所有样品一次完成实验。同时观察各组动物造模前后体重量和脾、胸腺、睾丸、肝、肾脏重量的变化。
   
　　1.2.3 统计学分析 统计学处理由第一作者采用SPSS10.0软件完成。所有数据以ˉx±s形式表示，组间比较用方差分析，采用Q检验，以P<0.05为差异具有显著性。

　　2 结果
    
　　2.1 各组动物的一般情况 脾虚模型动物在喂大黄后下煎剂2～3h出现稀便，造模4～5天后开始出现摄食明显减少、倦怠、懒动、畏寒、毛发疏散不洁或竖毛等，这与临床上脾虚证的症状较相似。而用黄芪四君汤防治后，上述症状表现有显著的改善。
   
　　2.2 黄芪四君汤对实验性脾虚证大鼠体重及脏器重量的影响 实验前各组大鼠体重差异无显著性，实验结束后脾虚模型组大鼠体重明显比正常对照组减轻（P<0.01），经灌服黄芪四君汤后，其大鼠体重比脾虚模型组升高（P<0.01），见表1。脾虚模型组大鼠脾脏、胸腺组织重量比值比正常对照组减轻，而睾丸、肾组织则升高。经灌服黄芪四君汤后能使脾脏、胸腺组织重量升高，又可使肾脏组织重量减轻，见表2。

　　表1 各组动物体重的比较 （略）
    
　　表2 各组动物脏器重量比值的比较 （略）

　　2.3 黄芪四君汤对实验性脾虚证大鼠血清细胞因子水平的影响 黄芪四君汤对脾虚证大鼠血清TNF、IL-6、IL-2水平的影响，见表3。脾虚模型组大鼠TNF、IL-6、IL-2含量均比正常对照组显著下降（P<0.01）;黄芪四君汤能明显升高TNF、IL-2含量（P<0.01），而IL-6含量有所升高，但差异无显著性。
    
　　表3 黄芪四君汤对脾虚证大鼠细胞因子水平的影响 （略）

　　3 讨论
    
　　本实验根据中医理论认为大黄苦寒，能伤元气，耗阴血，损脾胃以致寒虚，故选用国内目前常用的大黄来复制“脾虚”证动物模型，其大鼠表现的一系列症状与中医脾虚证如全身疲乏、四肢无力、纳差便溏等有很多相似之处。而应用黄芪四君汤灌服的动物，其脾虚症状较脾虚模型组有所改善，可使大鼠体重增加，脾脏、胸腺比值增大，肾脏比值减轻，表明黄芪四君汤对脾虚证大鼠有一定的保护作用，这与脾虚的理法方药相吻合，反证了脾虚模型的确定，说明利用大黄复制的大鼠脾虚证动物模型是成功的，而补气健脾方药对其治疗也是成功的，这是中医“脾主运化”理论在实验研究中的客观体现。
   
　　细胞因子是指主要由免疫细胞分泌的能调节细胞功能的小分子多肽，在免疫应答过程中，细胞因子对于细胞间相互作用、细胞的生长和分化有重要的调节作用，其中TNF主要由单核-巨噬细胞及激活的T细胞分泌的一种细胞因子，可直接杀伤和抑制肿瘤细胞或通过调节机体免疫功能，促进T细胞及其它杀伤细胞对肿瘤细胞杀伤，能提高中性粒细胞的吞噬能力和促进细胞分化和增殖的能力;IL-6主要由巨噬细胞、T细胞、B细胞等多种细胞产生的一种糖蛋白，对T细胞不同的分化阶段均起一种刺激的作用，并参与机体炎症反应和抗感染防御作用，还与自身免疫疾病等有密切相关;IL-2主要由活化的T淋巴细胞产生，其主要生物活性是促进T淋巴细胞和NK细胞的增殖，诱导NK细胞及其它细胞产生IL-6、TNF等细胞因子，促进B细胞的分泌和增殖及Ig的分泌等 ［4～8］ 。脾虚证与免疫功能低下有一定关系，但丁氏等报道在临床脾虚患者单位外周淋巴细胞体外分泌IL-2功能与正常比较无明显变化 ［9］ ，而王氏等的实验提示，大鼠脾虚时IL-2含量明显低于正常 ［10］ ，两者结论完全相反，但目前对这方面的实验研究还不够深入。本实验结果表明，在本实验条件下，用大黄复制脾虚模型大鼠，其血清TNF、IL-6、IL-2含量均显著的低于正常对照组（P<0.01），表明脾虚时破坏了细胞因子网络调节系统的平衡。而脾虚大鼠采用黄芪四君汤防治后，可使脾虚症状得到改善，血清TNF、IL-6、IL-2水平升高。由此可以认为，脾虚大鼠TNF、IL-6、IL-2水平下降可能是造成免疫系统功能紊乱的重要环节之一，最终引起脾虚时的细胞免疫和体液免疫功能低下，这可以在一定程度上作为解释中医脾为后天之本的微观物质基础。也证明了脾虚则气血化生乏源，脾失健运，气血化生能力下降，机体抵抗力减弱，就表现出免疫功能低下的一系列症状。而黄芪四君汤则可以通过补气健脾达到增强TNF、IL-6、IL-2的分泌，同时这几种细胞因子在一定程度上可以互相促进其分泌能力，达到调整免疫功能的作用。表明脾虚证的发生与细胞因子网络调节系统的失衡有关，而补气健脾中药对实验性脾虚证有较好的防治作用，这为脾虚时体内细胞因子水平的改变提供了理论依据。因此，TNF、IL-6、IL-2水平的变化可作为脾虚证微观辨证的参考指标之一。
    
　　参考文献
    
　　1 张道杰.四君子汤治疗脾气虚型胃肠病疗效评估.中国医药学报，1995，（1）:49.

  　  2 王汝俊，傅定中，邵庭荫，等.补中益气汤对脾虚大鼠胃粘膜易损伤性的复健作用研究.广州中医药大学学报，1995，12（3）:31-32.

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   　 5 李靖，黄鲁豫，张颖，等.肿瘤坏死因子-α诱导成骨细胞凋亡时Bcl-2和Bax蛋白表达变化.中国临床康复，2003，7（23）:3210.

　　6 金伯泉.细胞和分子免疫学，西安:世界图书出版公司，1998，97-133.

  　  7 龙振洲.医学免疫学，北京:人民卫生出版社，1997，48.

   　 8 陈锦芳，吴成，柳丽娟.慢性乙型肝炎湿热蕴脾证和脾胃气虚证与TNF-α及IL-6相关性研究.中国中西医结合杂志，2003，23（1）:28.

    　9 丁洁，吴咸中，薛小平.脾虚患者部分细胞和局部免疫功能指标的测定.中西医结合杂志，1992，（2）:77.

    　10 王再涛，童光东.温补培元方对脾虚细胞因子IL-2的影响.安徽中医学院学报，2001，（6）:41.    

　　作者单位:1　510405广州中医药大学
  
　　　　　　 2　广州中医药大学第一附属医院