药用多糖的分级及应用

    【文献标识码】 B    【文章编号】 1680-077X（2005）02-0167-02

    【Abstract】 This paper discussed the extraction，grade，deternination of Lycium barbarum polysacchande and its physical and chemical characteristics.The research obtained two kinds of LBP，then we abtained the molccular weight of LBP through measuring their riseocity.At last，we get the medicine part of LBP，which artaches to requirement of in-jection.It has been proved than the grade method was accurate and reliable.

    【Key words】 polysaccharide grade appliance

    一些中药材中含有药用价值很高的多糖成分，实验证实多糖具有增强人体免疫功能、抗肿瘤、降血脂等多种药效，根据药效学实验，多糖注射剂的药效远远高于口服制剂，初步估算可提高100倍以上。但对注射用药要求是相当严格的，最起码的要求是对水的溶解性要好，稳定性要高。而目前多糖的提取方法难以满足做注射剂的条件，因为所得到的是多分散系，分子量差别大。在水中的溶解性方面，其大分子量的多糖已达饱和时，小分子量的多糖远远没有达到饱和，这样就限制了药物的浓度，同时大分子量的多糖对其它杂质的吸附能力较强，影响多糖的纯度;另一方面，对于多糖也不是整体的多糖都具有相同药用价值。真正有较高药用价值的多糖仅是分子量较小的那一部分，可用分级的方法将其分离出来，用于制备药用多糖注射液，从而大大提高多糖的药用价值。现以宁夏枸杞子为例，说明药用多糖的提取、分级及应用。

    1 实验部分

     1.1 材料与试剂 枸杞子，无水乙醇，浓硫酸，721分光光度计，苯酚，粘度计。

     1.2 多糖的提取 精取100g枸杞子，置烧杯中加1200ml蒸馏水，浸泡2h后，在电子可调电炉上加热煮沸后，再调至微沸状态30min，取下后马上用脱脂棉过滤，再加入450ml水继续煎煮30min，过滤，两滤液合并，定容至1000ml。取提取液200ml加入800ml无水乙醇进行沉淀，在恒温20℃下陈化4h后，用脱脂棉过滤，过滤后再用95%的乙醇洗涤沉淀物，并不断更换乙醇，使颜色由橙黄色-黄色-淡黄色直至接近无色。多糖所吸附的有机物被洗脱下来，沉淀物即为精制多糖。

     1.3 多糖的分级 将多糖加热溶解在蒸馏水中，定容至200ml，取100ml三角烧瓶9只并编号，分别取样品10ml，相当1g样品，在1～9号烧瓶中分别加入无水乙醇2ml、4ml、6ml、8ml、10ml、20ml、30ml、40ml和80ml出现沉淀后，再陈化4～6h，过滤，可得到不同数量的多糖。

    1.4 各级含量的测定

    1.4.1 回归方程的建立 以葡萄糖为对照品，采用酚-硫酸法，在490nm波长测吸光度，以吸光度A和浓度C（μg/ml）建立回归方程，得C=-10.554+121.08A。

    1.4.2 含量测定 将用不同乙醇浓度沉淀的多糖溶解，并定容至一定体积，分别用酚-硫酸法进行测定，回归方程得到试液的浓度，由于对照品使用的葡萄糖与多糖的换算因子为0.9，多糖含量的计算公式:m=0.9C 1 V 1 ，所得到的各沉淀的含量见表1。

    1.4.3 各级多糖含量的计算 本实验1号样品沉淀量为第一级分，2号沉淀量减去1号的沉淀量为第二级分，依次类推可以得到不同级分的含量。8与9号无差别，它们的含量可认为是多糖的总含量。

     表1 不同含醇量所沉淀的多糖量（表略）

     1.5 有效成分的分离 观察不同级分的含量，其含量并非均匀分布，而是集中在两个区间内，即A区包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分和B区包括Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ级分，在这两个级分区间内占据多糖的90%以上，但Ⅳ、Ⅴ两个级分含量最少，仅占6%，如加入沉淀剂在此区间内能很好地将多糖分成两部分。为了保证A区的分子不进入B区，选择乙醇和试液的比为1:1的情况，实际操作:取样品液10ml加入无水乙醇10ml，在20℃的情况陈化3h，过滤使沉淀物和母液分离，在母液中重新加入无水乙醇100ml，可以看到白色的沉淀，用离心沉淀法得白色沉淀。将两沉淀多糖溶解，定容，用酚-硫酸法测其含量。得到A区重量为23.5×10 -3 g，B区重量为13.6×10 -3 g。

    1.6 分子量测定 多糖可测量的性质很多。在同系物中分子量是影响性质的关键，这里就测定两区的分子量，在分子量测定方法中，粘均分子量的测定方法是最简单的，本实验采用“一点法”，就是测量一个浓度下的粘度值，根据公式:［η］=2（η sp -1nη r ）  C  得到特性粘度［η］，再根据［η］=KM α 公式计算出粘均分子量，K和α是特性常数，在20℃时，K=13.2×10 -3 ，α=0.68，进行粘度测量数据见表3。

     表3 20℃测量结果及分子量（表略）
    
     2 结果与讨论

     从上面分子量大小来看，药用价值较高的B区分子量不足A区的一半。根据高聚物的特点，B区的溶解度和稳定性要远远高于A区。同时这样分离方法也会使多糖的纯度很高，这种溶解度大、稳定性好、纯度高的多糖，为注射液制备创造必备条件。
    
     作者单位:150040黑龙江哈尔滨黑龙江中医药大学