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【Abstract】 Objective To establish HPLC method to determine the relative substances in acyclovir dispersed tablets.Methods In the method C18（200×4.6mm，5μm）as the column and methanol-water（8:92）as the mobile phase and the detection wavelenth of254nm was specified.Result The linear range of acyclovir was0.5～7.5μg/ml（r=0.9996，n=5）and guanine was0.5～8.5μg/ml（r=0.9996，n=5）.Relative substances repeated experi-ments:RSD of guanine was1.0%（n=6），and RSD of other relative substances was1.3%（n=6）.Conclusion The method is convenient，reliable.It can be used to quality control.
【Key words】 acyclovir dispersed tablets HPLC relative substances
阿昔洛韦是一种具有嘌呤母核的广谱抗病毒药物。适用于:（1）单纯疱疹病毒感染;（2）带状疱疹;（3）免疫缺陷者水痘的治疗;（4）尖锐湿疣;（5）慢性病毒性乙型肝炎;（6）EB病毒感染，巨细胞病毒感染及器官移植患者的预防性用药;（7）急性视网膜坏死的治疗;（8）提高突发性耳聋的恢复率。我们研制的抗病毒药阿昔洛韦分散片，在水中3min内能均匀溶散为混悬液，是老、幼和吞咽困难患者理想的用药剂型。本文采用HPLC法测定阿昔洛韦分散片的有关物质，在生产中控制质量，获得满意的结果。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Spectra-Physics高效液相色谱仪;SP8810液相色谱泵，Spectra100紫外检测仪，Anastar色谱工作站。
1.2 试药 阿昔洛韦分散片由天津市蓝恒医药化工技术研究所研制。规格:0.1g。阿昔洛韦对照品由中国药品生物制品检定所提供。鸟嘌呤对照品由中国药品生物制品检定所提供。
2 方法与结果
2.1 方法 阿昔洛韦分散片有关物质测定方法参考USP26版Acyclovir Tablets和《中国药典》2000年版二部阿昔洛韦原料含量测定项。采用HPLC法。2.2 色谱条件及系统适应性试验
2.2.1 色谱条件 色谱柱:C 18 ，200×4.6mm，5μm（迪马色谱公司提供）。流动相:甲醇—水（8:92）。流速:1.0ml/min。检测波长:254nm。
2.2.2 系统适用性试验 （1）理论板数:按阿昔洛韦计算，理论板数为4038，以鸟嘌呤计，理论板数3869。（2）分离度:阿昔洛韦与相邻杂质峰（鸟嘌呤峰）分离度为2.15。符合要求。（3）拖尾因子:阿昔洛韦峰拖尾因子为0.95～1.05之间，符合要求。
2.3 有关物质检查线性试验 精密称取阿昔洛韦对照品10mg，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别取此溶液0.5、1.0、2.5、5.0、7.5ml，置100ml量瓶中，各加等量0.1mol/L醋酸溶液，摇匀，并用水稀释至刻度，分别取上述溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度（C）对峰面积（A）绘制回归曲线。线性方程:A=30010C+5900;r=0.9996（n=5），结果表明阿昔洛韦浓度在0.5～7.5μg/ml范围内，线性良好。
2.4 鸟嘌呤线性试验 精密称取鸟嘌呤对照品10mg，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别取此溶液0.5、1.0、2.5、5.0、8.5ml，置100ml量瓶中，各加等量0.1mol/L醋酸溶液，摇匀，并用水稀释至刻度，分别取上述溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度（C）对峰面积（A）绘制回归曲线。线性方程:A=28882C+4734;r=0.9996（n=5），结果表明鸟嘌呤浓度在0.5～8.5μg/ml范围内，线性良好。
2.5 有关物质检查重复性试验 取本品，研细，精密称取适量（约相当于阿昔洛韦25mg）共6份，分别置50ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，振摇使溶解，加0.1mol/L醋酸溶液10ml，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液;精密量此溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。另精密称取鸟嘌呤对照品10mg，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，取此溶液5.0ml，置100ml量瓶中，加0.1mol/L醋酸溶液5.0ml，摇匀，加水稀释至刻度，作为鸟嘌呤对照品溶液。各取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。鸟嘌呤RSD为1.0%（n=6），其他杂质RSD为1.3%（n=6）。结果表明，本品有关物质检查重复性良好。
2.6 样品放置时间稳定性检查 取本品，分别于0、2、4、6、8h取样10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果测定溶液在8h内稳定。
2.7 有关物质检查精密度试验 按试验方法配制同一批样品5份，依法测定，结果鸟嘌呤日间、日内RSD分别为1.2%和1.6%，其他杂质日间、日内RSD分别为1.4%和1.7%。
2.8 鸟嘌呤溶液放置时间稳定性试验 精密称取鸟嘌呤对照品10mg，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液使溶解，并用稀释至刻度，摇匀，取此溶液10.0ml，置100ml量瓶中，加0.1mol/L醋酸溶液10ml，摇匀，并用水稀释至刻度，分别于2、4、6、8h各取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明，鸟嘌呤溶液在8h内稳定（RSD=0.2%）。
2.9 有关物质检查最低检出限 经测定，阿昔洛韦最低检出限为1ng，鸟嘌呤最低检出限为1ng。
2.10 样品有关物质检查 取本品，研细，精密称取适量（约相当于阿昔洛韦25mg），置50ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，振摇使溶解，加0.1mol/L醋酸溶液10ml，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液;精密量此溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。另精密称取鸟嘌呤对照品10mg，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，取此溶液5.0ml，置100ml量瓶中，加0.1mol/L醋酸溶液5.0ml，摇匀，加水稀释至刻度，作为鸟嘌呤对照品溶液。分别取上述溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，阿昔洛韦分散片的有关物质检查均符合规定。结果见表1。
表1 样品有关物质检查（略）结果表明，用HPLC法检查阿昔洛韦分散片的有关物 质。方法简便、可靠，可用于本品的质量控制。
3 讨论
3.1 检测波长的选择 精密称取阿昔洛韦10mg，置10ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液适量，振摇使溶解，并用0.4%氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀，作为储备液。取此溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加0.1mol/L醋酸溶液1ml，摇匀，加水稀释至刻度，取此溶液照分光光度法（《中国药典》2000年版二部附录ⅣA），于200～400nm波长处扫描，结果表明，本品在252nm波长处有最大吸收。由于本品主要杂质为鸟嘌呤，因此，我们对此也进行了紫外扫描。精密称取鸟嘌呤对照品10mg，置10ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液溶解并用水稀释至刻度，摇匀，作为储备液。取此溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加0.1mol/L醋酸溶液1ml，摇匀，加水稀释至刻度，取此溶液照分光光度法（《中国药典》2000年版二部附录ⅣA），于200～400nm波长处扫描，结果表明，鸟嘌呤最大吸收峰为273nm，在254nm有较大吸收。选定检测波长为254nm。
3.2 流动相的选择 采用流动相:甲醇-水（10:90）。精密称取阿昔洛韦10mg，置10ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。取此溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加0.1mol/L醋酸溶液1ml，摇匀，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，取此液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明，阿昔洛韦保留时间为6.54min，保留时间稍短。调整此流动相比例，甲醇-水（6:94），取上述供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明，阿昔洛韦保留时间为9.85min，保留时间合适，但峰形不理想。继续调整流动相比例，甲醇-水（8:92），取上述供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明，阿昔洛韦保留时间为9.16min，保留时间合适，且峰形理想。故选择采用此流动相。
3.3 流动相、溶媒和辅料干扰试验 取流动相10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明流动相不干扰有关物质的检查。取0.4%氢氧化钠溶液5ml，加0.1mol/L醋酸溶液5ml，摇匀，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，溶媒不干扰含量测定。另精密称取处方量辅料，照供试品溶液制备方法配制成溶液，滤过，取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明辅料不干扰有关物质检查。
表2 破坏性试验结果（略）
3.4 专属性试验
3.4.1 阿昔洛韦与鸟嘌呤的分离试验 在本色谱条件下，阿昔洛韦与鸟嘌呤的分离度为2.1，理论板数分别为4038和3869。
3.4.2 破坏性试验 日光破坏试验、酸降解试验、碱降解试验、氧化破坏试验见表2。以上结果表明本品对高温、日光比较稳定，杂质峰数量无明显变化，在强酸性条件下，鸟嘌呤量增加，另有4个降解产物，均与主峰分离良好，在强碱性条件下，只见到鸟嘌呤量杂质峰。氧化破坏，除鸟嘌呤量有增加，另有两个杂质峰，保留时间分别为2.88min和4.00min，均与主峰7.96min分离良好。说明本试验条件下，各杂质峰与主峰分离良好。
作者单位:300070天津市医药科学研究所
300011天津隆顺榕制药厂
300074天津市蓝恒医药化工技术研究所