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【摘要】 弗氏完全佐剂 （ Freund’s complete adjuvant，FCA ） 诱发兔膝关节炎的临床表现与关节病理变化接近于人类的类风湿性关节炎。本工作将适量FCA注射到大白兔关节腔内，建立兔类风湿性关节炎模型，再注射两种非放制品于大白兔体内，在光镜和电镜下观察其疗效。结果表明两种非放制品对关节炎有一定疗效。
【关键词】 关节炎； 非放； 疗效
Evaluation the therapeutic effect of non-radioactive compounds for the arthritis
HE Jia-heng，JIANG Shu-bin，BING Wen-zeng.Chemistry Colloge，Sichuan University，Chengdu 610064，China
【Abstract】 Clinic features and arthrosis pathology changes of Freund’s complete adjuvant （ FCA） place a premium on rabbit’s knee joint close to human’s genus rheumatoid arthritis. In this work，we used FCA and made arthritis model，then injected two non-radioactive compounds through in vein on the ear. Observe the curative effect by the light-microscpy and electricity-mirror. The results indicated that two non-radioactive compounds have a certain curative effect to arthritis.
【Key words】 arthritis； non-radioactive； curative effect
在现代医药学研究中，实验研究占有极其重要的位置。开展实验研究的首要任务是研制模拟与疾病相近的、重复性好的适用的动物模型［1］。医学基础研究以实验研究为主体，动物模型为其主要研究对象；而医学临床研究和药学研究，也要借用动物模型来证实疗效。
风湿性关节炎是一种以关节滑膜炎性症状为主的全身性结缔组织病，目前尚无特异疗法［2］。弗氏完全佐剂 （Freund’s complete adjuvant，FCA ） 诱发兔膝关节的临床表现与关节病理变化接近于人类的类风湿性关节炎［3］。用FCA关节腔内注射，可在光镜和电镜下观察其模型建立情况。本工作利用FCA关节腔内注射让大白兔表现为关节炎，再注射自制的两种非放制品于大白兔体内，在光镜和电镜下观察其疗效。结果表明两种非放制品对关节炎有一定疗效。1 材料与方法
1.1 实验动物 健康新西南大白兔23只，体重2～3kg，雌雄不限。
1.2 实验方法 用25%乌拉坦按5ml/（kg·体重）做腹腔麻醉。在无菌条件下，将0.5ml FCA分别注射到各家兔的右膝关节内，造成兔膝关节炎。于关节炎第3周时随机抓2只兔子做模型建立评价。然后将剩下的兔子随机分为3组，一组3只，作为空白对照，另两组分别为9只。经过兔耳缘静脉注射1ml自备的非放制品溶液（非放制品经过滤高压灭菌，并消除热原）分别到每一组，隔1天1次。本实验分为3个疗程，第1个疗程接受注射1周，第2个疗程接受注射2周，第3个疗程接受注射3周。注射后通过肉眼观察、X线透视、组织切片电镜观察。
1.3 观察项目
1.3.1 肉眼观察 兔膝关节肿胀、浮髌征、活动及滑膜软骨表面情况。
1.3.2 透视 每个疗程后将兔子与对照组做X线透视，观察其关节肿胀、关节腔内积液、关节腔外软组织情况。
1.3.3 组织切片 分别于非放制品注射后1周、2周、3周处死动物取材，将兔子的左右关节取出，用25%的福尔马林溶液固定，5%硝酸脱钙。
2 结果与讨论
2.1 肉眼所见 FCA注射关节腔内1周后，关节腔内滑液渗出，2周后关节明显红肿，表现为滑膜充血性炎症反应，嗜中性粒细胞浸润，并可见到组织内高电子密度免疫复合物沉积，嗜中性粒细胞吞噬免疫复合物后转为类风湿细胞，同时释放炎症介质。关节活动差，足不能着地。经过3周治疗后，兔子炎症细胞减少，活动能力加强。
2.2 组织切片结果 关于炎细胞多少的问题，因为一般实验都不计数其数量，而是通过半定量方法，采用炎细胞浸润程度表示，具体反映为基本无炎细胞浸润（-）；轻度炎细胞浸润（+），即少量；重度炎细胞浸润（++），即大量或弥漫性浸润。结果见表1所示。表1 兔膝关节实验切片观察注：1）A——Sn-TTHMP；B——Sn-HEDTMP；（n）——用药后n周；0-0——空白样；A-0-1——自身对照
用药1周即模型建立4周后，各兔子的血管充血程度很严重，炎细胞浸润程度达到最高，对照组与Sn-TTHMP组的主要炎细胞类型为中性炎细胞和淋巴炎细胞，未见浆细胞。Sn-HEDTMP组主要是中性炎细胞；与对照组相比，Sn-TTHMP组的间质水肿程度有所减缓，而Sn-HEDTMP组的间质水肿程度较为严重一些。纤维蛋白渗出程度，也是Sn-HEDTMP组较对照组和Sn-TTHMP组的严重一些。
用药2周后，将兔子的左右关节取出作自身对照发现：Sn-TTHMP组的血管充血程度较Sn-HEDTMP组的有所减缓，炎细胞浸润程度两组无明显差异。变化较为明显的是两组的炎症细胞均有明显减少，以Sn-HEDTMP组的更好一些。两组的间质水肿程度均有所减缓，纤维蛋白的渗出程度也较用药1周后缓解了一个等级。
用药3周后，在血管充血程度方面，Sn-TTHMP组的恢复不如Sn-HEDTMP组；炎细胞浸润程度两组均较用药两周后有所缓解，两者无明显差别；两组的炎细胞均有所减少，类型上Sn-TTHMP组的有一只兔子出现少量浆细胞，而Sn-HEDTMP组的几乎均为中性炎细胞；两组兔子的间质水肿程度和纤维蛋白渗出程度均减至最低程度。各个样品的关节腔外软组织切片见图1～7。
3 结论
建立了模拟关节炎的模型，对Sn-TTHMP、Sn-HEDTMP进行了初期临床研究，发现两种配合物的使用对兔子的炎症症状有所减缓，临床表现为炎症细胞有所减少，间质水肿程度和纤维蛋白渗出程度减至最低程度。表明两种配合物对关节炎可能有一定疗效，有进一步研究的价值。
【参考文献】
1 徐叔云.药理实验方法学.北京：人民卫生出版社，1991，723.
2 石奉文，张悬文，张标，等.关节腔内注射尿素治疗实际性类风湿性关节炎.中国康复医学杂志，1994，9（1）: 24-26.
3 陈敏珠.药理学进展（抗炎免疫药理分册）抗炎药筛选规程.北京：人民卫生出版社，1982，176.
基金项目：中国工程物理研究院军民两用基金资助项目（JM20008）
作者单位： 1 610064 四川成都，四川大学化学学院
2 621900 四川绵阳，中国工程物理研究院核物理与化学研究所
（编辑：齐 永）