注射用血凝酶（立止血）细菌内毒素检查的方法学研究

　　【摘要】  目的  建立注射用血凝酶的细菌内毒素检查方法。方法  用4个生产厂的鲎试剂对注射用血凝酶进行干扰试验研究。结果  注射用血凝酶对细菌内毒素检查无干扰作用。结论  可以用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法控制其热原。

    【关键词】  注射用血凝酶；细菌内毒素检查；凝胶法

      【Abstract】  Objective  To establish a method for determination of the bacterial endotoxin in haemocoagulase Atrox for injection.Methods  Inhibition and enhancement test was performed with tachypleus amebocyte lysate manufactured by four different companies.Results  The bacterial endotoxins test would not be interfered by the injection.Conclusion  The results suggested that bacterial endotoxins test could be used as an alternative method for the rabbit pyrogen test for Haemocoagulase Atrox for Injection.

    【Key words】  haemocoagulase atrox for injection;bacterial endotoxin;gel-clot method

    立止血是由巴西矛头蝮蛇（Brothrops atrox，巴西蝮蛇属）的蛇毒中分离和提纯所得到的血凝酶，在临床中广泛应用于减少流血或止血的各种医疗病症。立止血的药品注册标准为热原检查。为了考察是否可以用细菌内毒素检查来代替该品种的热原检查，笔者对立止血进行了细菌内毒素检查的方法学研究。现将研究结果报告如下。

    1  实验材料与仪器

    1.1  药品  立止血(注射用巴曲酶)：批号100102、100903、101604瑞士素高药厂（Solco Basle Ltd.）。

    1.2  鲎试剂（TAL）  批号0204242，λ=0.25EU/ml，湛江安度斯生物制品有限公司；批号20010107，λ=0.25EU/ml，广西北海市制药厂；批号020206，λ=0.125EU/ml，0.1ml/支，湛江海洋生物制品厂出品；批号020402，λ=0.125EU/ml，厦门鲎试剂厂出品。

    1.3  细菌检查用水（BET水）  批号0204180，5ml/支，湛江安度斯生物制品有限公司。

    1.4  细菌内毒素工作标准品  批号2001-11，160EU/支，中国药品生物制品检定所。

    2  实验方法

    2.1  供试品细菌内毒素限值的确定  据药典［1］的规定，由立止血进口注册标准中的热原剂量0.1kU/kg，计算出本品的细菌内毒素限值为50EU/kU。

    2.2  鲎试剂灵敏度复核  按药典方法进行复核，结果显示，实验所用鲎试剂灵敏度均符合规定，结果见表1。表1  鲎试剂灵敏度复核结果

    2.3  供试品干扰试验的预试验［2］  取细菌内毒素工作标准品1支，用BET水配制成0.5EU/ml、0.25EU/ml的细菌内毒素标准液，备用。取本品1支，用BET水配制成0.08kU/ml、0.04kU/ml、0.02kU/ml、0.01kU/ml、0.005kU/ml、0.0025kU/ml、0.00125kU/ml的本品溶液，备用。

    每个供试品浓度取鲎试剂4支，其中2支作样品管，用BET水0.1ml溶解TAL，另外2支作供试品阳性管（PPC管），用相应浓度的供试品溶液溶解；然后，样品管加0.1ml的相应浓度的供试品溶液，PPC管加2λ的细菌内毒素溶液0.1ml，另取2支TAL，分别作阴性和阳性对照。试验结果见表2。表2  立止血干扰试验预试验的结果从表2可见，立止血各个浓度的溶液对鲎试验均无抑制或增强作用。

    2.4  供试品的干扰试验  依据药典方法［1］，按50EU/kU的限值，采用不同灵敏度（0.25EU/ml、0.125EU/ml，药液浓度为0.005kU/ml）、四个厂家生产的鲎试剂（TAL）进行供试品干扰试验。综合后的各次试验结果见表3。表3  立止血干扰试验的结果

    2.5  立止血细菌内毒素检查法与家兔法比较  取21个批号样品，按50EU/kU的限量，按药典方法进行样品检验，检验结果均为阴性，与家兔法检查结果一致。

    3  讨论

    根据立止血的人用剂量和热原检查剂量及中国药典2000年版二部的有关规定，本品的细菌内毒素限值确定为50EU/kU。笔者选择了3个批号的样品和4个厂家生产的鲎试剂进行干扰试验，从试验结果来看，立止血按50EU/kU的限值进行细菌内毒素检查时对所用的鲎试剂无干扰作用，其21批样品的细菌内毒素检验结果与热原检查结果相符合。

    笔者用细菌内毒素凝胶法对本品进行检测，与传统的家兔热原检查法比较，具有方便快捷、检测灵敏度高等优点。随着试剂的不断发展和试验方法的逐步完善，用鲎试剂法取代家兔法进行细菌内毒素检查，从面来保证药品临床使用的安全已是必然趋势，目前各国药典的药品或生物制品已普遍采用的细菌内毒素检查法。

    综上，用细菌内毒素检查来代替立止血的热原检查是可行的。

    【参考文献】

    1  国家药典委员会.中国药典，2000年版二部.北京：化学工业出版社，2000，附录ⅪⅩF，204.

    2  黄清泉，夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计.中国药学杂志，1997，32（2）：72.

   作者单位： 570216 海南海口，海南省药品检验所

　  (编辑：石  岚)