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【摘要】 目的 研制三白饮的质量标准。方法 采用薄层扫描法测定三白饮中白花蛇舌草β-谷甾醇的含量。结果 此法灵敏度高，重现性好，5个不同批次三白饮中β-谷甾醇的含量为0.164%～0.176%；平均加样回收率为97.1%，RSD为1.28%。结论 本法操作简便，结果准确，可用于三白饮的质量控制。
【关键词】 三白饮；β-谷甾醇；质量控制
三白饮是我院研制的由白花蛇舌草、白芷、白僵蚕、丹参、茵陈、紫花地丁、蒲公英、赤芍、凌霄花等十余味中药组成的纯中药制剂，具有清热消斑、祛风解毒、活血化瘀功效，临床用于治疗各种痤疮，其临床有效率98.3%。
1 仪器与试药
薄层扫描仪(日本岛津CS-930型)；硅胶HPTLC板(青岛海洋化工厂)；定量毛细管(CAMAG公司)；β-谷甾醇对照品、丹酚酸B对照品、绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所)；白花蛇舌草、白芷、白僵蚕、丹参、茵陈、紫花地丁、蒲公英、赤芍、凌霄花等14味药材购于安徽省亳州市中药材公司，品种经过鉴定符合《中国药典》2005年版一部［1］；其他试剂均为AR级。
2 处方
白花蛇舌草、白芷、白僵蚕、丹参、茵陈、紫花地丁、蒲公英、赤芍、凌霄花等。
3 制备
取白花蛇舌草、白芷、白僵蚕、丹参、茵陈、紫花地丁、蒲公英、赤芍、凌霄花等14味中药置夹层锅中加水15倍浸泡0.5h，通水蒸气煎煮两次，第一次沸后1.5h，第二次加水10倍煎煮沸后1.0h，合并两次煎液，静置12h，过滤，浓缩至1:1.5（药液:药材），过滤，加入橘子香精、甜味剂、苯甲酸钠搅拌均匀，添加纯净水至1000ml，分装200ml，即得。
4 质量控制
4.1 性状 本品为棕褐色澄清液体，味苦略甜，有橘子香气。
4.2 鉴别
4.2.1 白芷的鉴别
（1）供试品溶液的配制：取本品12ml，用稀盐酸调pH值至2～3，用氯仿提取2次，每次10ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。
（2）对照药材溶液的配制：另取白芷对照药材1g，加水约150ml，煎煮30min，放冷离心（1500转/min）10min，取上清液，用稀盐酸调pH值至2～3，用氯仿提取2次，每次10ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，制成对照药材溶液。
（3）薄层层析及结果：照薄层色谱法（《中国药典》2005年版·一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲酸（20:1）为展开剂，饱和20min后展开，取出晾干，置于紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
4.2.2 丹参的鉴别
（1）供试品溶液的制备：取本品10ml，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
（2）对照品溶液的制备：取丹酚酸B对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液。
（3）对照药材溶液的制备：取丹参对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作成对照药材溶液。
（4）薄层层析及结果：照薄层色谱法（《中国药典》2005年版·一部附录VIB）试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜层析板上，以丙酮-36%醋酸-氨水（10:25:1）为展开剂，展开，取出，晾干，用氨蒸气熏5min，于紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点（亮蓝色）。
4.2.3 茵陈的鉴别
（1） 供试品溶液的制备：取本品20ml，加枸橼酸饱和水溶液调pH值至2～3，用醋酸乙酯提取2次(20ml，20ml)，合并醋酸乙酯液，水浴蒸至约1ml，备用。
（2） 对照药材溶液的制备：取茵陈对照药材2g，加水40ml煎煮30min，放冷，滤过，取滤液，按供试品制备方法同法操作。
（3） 对照品溶液的制备：取绿原酸对照品制成1mg/ml的乙醇溶液，备用。
（4） 薄层层析及结果：照薄层色谱法（《中国药典》2005年版·一部附录VIB）试验，吸取上述3种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯（5：1）为展开剂，展开、取出、晾干，置紫外灯365nm下检视，供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光的斑点。
4.3 检测pH值 pH值为5.5～7.0。
4.4 含量测定
4.4.1 薄层扫描条件 （1）层析板：硅胶HPTLC板，（2）展开剂为苯-氯仿-丙酮(8∶5∶1)，上行展开10cm后，取出，晾干，喷以20%硫酸乙醇溶液，105℃烘约3min，至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖一同样大小的洁净玻璃板，四周用胶带封牢，扫描测定。（3）扫描条件：反射式双波长锯齿扫描；测定波长 (λs)为535nm，参比波长(λR)为470nm；线性参数SX=3；狭缝：1.2mm×0.4mm；灵敏度中。
4.4.2 对照品溶液的制备 精密称取β-谷甾醇对照品5mg，置10ml量瓶中，用氯仿定容，配制成0.5mg/ml溶液，作为对照品溶液。
4.4.3 供试品溶液的制备 取本品20ml置分液漏斗中，用水饱和的氯仿萃取3次，每次20ml，合并氯仿液，移入烧瓶中，减压回收氯仿，浓缩至近干，将残余物用氯仿溶解，转入10ml容量瓶中定容，作为供试品溶液。
4.4.4 线性关系的考察 分别精密吸取β-谷甾醇对照品溶液1、2、3、4、5μl，分别点于同一硅胶HPTLC板上，依法展开，显色并进行全程扫描，测定各斑点的面积。以斑点面积积分值为纵坐标Y，以点样量为横坐标X，绘制标准曲线y=1576+1643x，相关系数r=0.9999，表明β-谷甾醇在0.5～2.5μg/μl之间呈线性关系。
4.4.5 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液5ul重复进样5次，测得峰面积积分值RSD为2.06%。
4.4.6 稳定性试验 取β-谷甾醇对照品溶液2μl点于硅胶HPTLC板上，依法展开，显色后，每隔2h重复扫描测定，结果显示12h内显色斑点峰面积积分值基本稳定，RSD为1.25%。
4.4.7 重复性试验 精密量取同一批号样品5份，按“供试品溶液的制备”和“样品含量测定”项下操作，测得样品中β-谷甾醇的含量为0.176%，RSD为1.48%(n=5)。
4.4.8 回收率试验 取5份已知含量的样品，分别加入β-谷甾醇对照品溶液适量，混匀后制成回收液。取回收液2μl，对照品溶液1μl和3μl，点在同一块硅胶HPTLC板上，依法测定，外标二点法定量，平均回收率为97.1%，RSD为1.28%(n=5)。
4.4.9 样品测定 分别精密吸取药材供试液2μl，对照品溶液1μl和3μl，交叉点于同一硅胶HPTLC板上，按上述条件展开，显色，扫描测定6批样品中β-谷甾醇的含量，以外标二点法计算含量。对照品及样品薄层扫描色谱图用上述扫描条件及处理方法得到供试品样品和β-谷甾醇对照品TLC图。结果表明样品的色谱中与对照品相同波长处有吸收峰，且样品中的β-谷甾醇与杂质分离良好。5个不同批次供试品按上述方法进行含量测定，结果5个不同批次样品中β-谷甾醇含量分别为0.164、0.172、0.169、0.176、0.175。
5 讨论
由于β-谷甾醇溶于氯仿、热乙醇，而不溶于冷乙醇、乙醚，故采用氯仿作为溶剂萃取，分离效果比较完全，β-谷甾醇具抗菌、消炎和抗肿瘤作用，是白花蛇舌草药效成分之一，本实验对白花蛇舌草中的β-谷甾醇含量采用薄层扫描法进行了测定方法的考察，结果表明该法简便，灵敏度高，有较好的重现性和加样回收率，可作为本制剂的质量标准的依据。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中国药典，一部.北京：化学工业出版社，2005，1.
作者单位：1 430015 湖北武汉，湖北省新华医院
2 430400 湖北武汉，武汉市新洲区中医医院
(编辑：汪 洋)