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HPLC法测定复方氯霉素洗剂中氯霉素和水杨酸的含量 (pdf)
【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定复方氯霉素洗剂中氯霉素和水杨酸含量。方法 色谱柱为C18，流动相为磷酸盐缓冲液（0.01M,pH3.5）：甲醇（55:45），流速为1.0ml/min，检测波长为278nm，柱温为25℃。结果 氯霉素、水杨酸分别在 4.08～40.8μg/ml（r=0.9989）、7.76～77.6μg/ml（r=0.9990）范围内呈良好的线性关系，平均回收率分别为100.5%（RSD=0.66%）、100.1%（RSD=0.52%，n=9）。结论 本方法简便、准确、快速、重现性好，可用于该制剂的含量测定。
【关键词】 复方氯霉素洗剂；氯霉素；水杨酸； 高效液相色谱法
Determination of chloramphenicol and salicylic acid in chloramphenicol lotion compound by HPLC
YANG Hui , CUI Ai-ying.The Second Hospital of Lianyungang,Jiangsu Lianyungang 222023,China
【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for content determination of Chloramphenicol and Salicylic acid in Chloramphenicol lotion Compound.Methods The separation was performed on C18column.The mobile phase was consisted of KH2PO4buffer (0.01M ,pH3.5): methanol(55:45) with a flow rate at 1.0ml/min and detection wavelength at 278nm.The column temperature was 25℃.Results A good linear range of Chloramphenicol and Salicylic acid respectively in the range from 4.08～40.8μg/ml9r=0.9989)﹑and 7.76～77.6μg/ml(r=0.9990).The average recoveries were 100.5％(RSD=0.66％)and 100.1％(RSD=0.52％,n=9),respectively.Conclusion This method was convenient,accurate,rapid and reproducible and suitable for the determination.
【Key words】 chloramphenicol lotion compound;chloramphenicol; salicylic acid;HPLC
复方氯霉素洗剂具有止痒、杀菌、消炎等作用，临床用于治疗脂溢伴毛囊炎型皮炎。据文献报道，该制剂的含量测定多采用紫外分光光度法或中和滴定法［1］。本文采用HPLC法同时测定氯霉素和水杨酸的含量，方法简便、快速、准确、重现性好，可作为该制剂的含量测定。
1 仪器与试剂
高效液相色谱系统，包括P680A低压四元梯度泵、UVD170U检测器、CHROMELEON色谱工作站（德国戴安公司）；氯霉素对照品（北京市燕京制药厂，批号：040612），水杨酸对照品（南京白敬宇制药有限公司，批号：050319）；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；复方氯霉素洗剂为本院自制。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 流动相：磷酸二氢钾缓冲液（0.01M，pH3.5）：甲醇（55:45）；色谱柱：Symmetry-C18（150mm×3.9mm，5μm）；流速：1.0ml/min；检测波长：278nm；柱温：25℃，进样量20μl。色谱详见图1（略）。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取100℃干燥至恒重的氯霉素和水杨酸对照品适量，用流动相稀释成浓度分别为0.204、0.388mg/ml的贮备液。再精密吸取该溶液1ml置10ml量瓶中，加流动相定容,摇匀，即得对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 精密量取样品溶液1ml于100ml量瓶中，加入流动相，定容，摇匀，精密吸取该溶液1ml置10ml量瓶中，加流动相定容,摇匀，即得供试品溶液。
2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例,称取除氯霉素和水杨酸外的其余成分适量制成阴性样品,再按“2.3”项下方法制成阴性对照品溶液。
2.5 标准曲线的绘制 精密量取2.2项下贮备液1、3、5、7、10ml，分别置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得系列标准溶液。按上述条件进样测定，以峰面积（A）为纵坐标，进样浓度（C）为横坐标绘制标准曲线，分别得氯霉素、水杨酸回归方程A氯霉素=1.1870+6.8450C（r=0.9989）、A水杨酸=0.09947+3.0291C（r=0.9990）。结果表明氯霉素和水杨酸在 4.08～40.8和7.76～77.6μg/ml范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验 精取2.2项下贮备液5ml置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，重复进样测定5次，结果氯霉素、水杨酸峰面积的RSD分别为1.23%、0.98%。
2.7 重现性试验 取样品共5份，按“2.3”项下制备供试液，依法测定，结果氯霉素、水杨酸峰面积的RSD分别为1.53%、1.76%。
2.8 稳定性试验 取2.3项下供试品溶液室温放置0、3、6、9、12h进样测定峰面积，结果氯霉素、水杨酸峰面积的RSD分别为1.54%、0.95%。表明溶液在12h内稳定性良好。
2.9 回收率试验 精密量取已知含量的样品1ml，分别准确加入“2.2”项下储备液各5.0ml、6.0ml、7.0ml，并分别置于100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。按“2.5”项下方法试验，以回归方程计算各自的回收率，结果详见表1。表1 回收率测定结果
2.10 样品含量测定 取样品3批，按“2.3”项下方法制备成供试品溶液，按上述色谱条件测定，代入标准曲线计算含量，结果见表2。表2 样品含量测定结果
3 讨论
因本制剂中水杨酸含量是氯霉素的2倍，并且在278nm波长附近也有较大的吸收度，故选择氯霉素的最大吸收波长278nm为测定波长［2］。
由于本实验中以甲醇-水二元系统为流动相时水杨酸的吸收峰拖尾较重，后改用（0.01M，pH3.5）磷酸盐缓冲液后，二者的吸收峰均很对称，且空白对测定无干扰。故本文采用以上色谱条件。
本法可同时测定复方氯霉素洗剂中两主药的含量，操作简单、快速，结果准确可靠，可作为该制剂的含量测定方法。
【参考文献】
1 中华人民共和国卫生部药政局.中国医院制剂规范（西药制剂）,第2版.北京:中国医药科技出版社,1995,103.
2 缪春辉,冷爱国,涂飞龙.复方氯霉素醇溶液中3种成分的含量测定.东南国防医药,2003，5(2):102.
作者单位：222023 江苏连云港，连云港市第二人民医院
(编辑：石 岚)