柔毛淫羊藿对去卵巢小鼠骨组织形态计量学的影响

【摘要】  目的 观察柔毛淫羊藿对去卵巢小鼠骨组织形态计量学的影响。 方法 雌性昆明种小鼠，去除卵巢后随机分为假手术组、模型组、己烯雌酚组及柔毛淫羊藿高、中、低剂量组。给予相应药物后观察动物骨组织形态计量学的变化。 结果 与假手术组比较，给药60天后模型组动物成骨细胞数、骨小梁骨细胞数均明显减少；破骨细胞数明显增加；骨皮质厚度明显变薄；骨小梁面积明显减少。与模型组比较，柔毛淫羊藿组动物成骨细胞数、骨小梁骨细胞数均明显增多；破骨细胞数明显减少；骨皮质厚度明显变厚；骨小梁面积明显增加。结论 柔毛淫羊藿对去卵巢骨质疏松小鼠具有类似雌激素的治疗作用，能够改善动物的骨组织形态计量学指标。

【关键词】  柔毛淫羊藿;去卵巢小鼠;骨组织形态计量学

淫羊藿首见于《神农本草经》，其具有温肾壮阳、强筋骨、祛风湿的功效，中医临床用于治疗肾虚阳痿、宫冷不孕、风湿痹痛等多种疾病。有资料报道，淫羊藿煎剂及醇浸出液尚有降压、强心、抗心律失常、镇咳、祛痰、平喘、抗炎、抗衰老等作用［1］。近年，淫羊藿在临床上广泛用于治疗骨质疏松症［2,3］。

    然而，不管是《神农本草经》所载的淫羊藿，或是中医临床应用的淫羊藿，还是药效报道的淫羊藿均为数种淫羊藿属植物的统称，尚未见有具体某一淫羊藿药材的药理作用研究。鉴于此，本实验通过骨质疏松小鼠模型，以己烯雌酚作为阳性对照，观察贵州产柔毛淫羊藿对动物模型骨组织形态计量学方面的影响，以期对柔毛淫羊藿的药用价值进行评估，为其进一步的开发利用提供参考。

    1  材料与方法

    1．1  实验材料  柔毛淫羊藿：棕褐色浸膏干粉，1g相当于6.28g生药，实验时蒸馏水配制成所需浓度的混悬液；己烯雌酚：合肥久联制药有限公司，批号：20060518；BI-2000医学图像分析系统：成都泰盟有限公司；昆明种雌性小鼠，体重20～22g，由贵阳医学院动物中心提供，合格证号：SCXK（黔）2002-0001。

    1.2  实验方法

    1.2.1  模型制作  将小鼠予戊巴比妥钠（10mg/kg）腹腔注射（ip）麻醉，俯位固定，无菌操作，背部脊柱两侧做切口，分别找到左右侧输卵管，摘除其末端的卵巢，保留子宫。其中14只小鼠作假手术组，只切除卵巢旁等体积大脂肪组织。缝合切口前动物给予青霉素（4万u/kg）预防感染，术后小鼠回笼饲养，自由饮食。

    1.2.2  分组及用药  术后次日，除假手术组外其余小鼠随机分为5组（每组14只）：模型组（等容积生理盐水）、己烯雌酚组（2mg/kg）、柔毛淫羊藿高剂量组（200mg/kg）、柔毛淫羊藿中剂量组（100mg/kg）、柔毛淫羊藿低剂量组（50mg/kg）。加上假手术组（等容积生理盐水）共6组动物。小鼠均灌胃给药（ig），每天1次，连续60天。每周称量小鼠体重，根据体重调整药量。   

    1.2.3  骨组织形态学观察  分别取小鼠右股骨置于中性福尔马林中浸泡，HE染色，用BI-2000医学图像分析系统进行骨组织形态学观察（指标有成骨细胞数、破骨细胞数、骨皮质厚度、骨小梁骨细胞数、骨小梁面积）。

    1.3  数据处理  实验数据用SPSS11.5软件进行计算及t检验处理。

    2  结果

    与假手术组比较，模型组动物的成骨细胞数、骨皮质厚度、骨小梁骨细胞数、骨小梁面积明显降低（P<0.01或P<0.05）,破骨细胞数明显增加（P<0.05）;与模型组比较，除了柔毛淫羊藿高剂量组对骨小梁骨细胞数无明显影响外（P>0.05），柔毛淫羊藿高、中、低剂量组动物的成骨细胞数、骨皮质厚度、骨小梁骨细胞数、骨小梁面积明显升高（P<0.01或P<0.05）, 破骨细胞数明显减少（P<0.01或P<0.05）。见表1。表1  对骨质疏松小鼠骨组织形态计量学的影响注：与假手术组比较△P< 0.05，△△P<0.01；与模型组比较*P<0.05，**P<0.01

    3  讨论

　　摘除卵巢的动物是目前公认的模仿人类骨质疏松症的模型，Wronski等研究发现［4，5］，成年动物卵巢切除后，由于雌激素缺乏使骨改建呈高转换型，骨吸收和骨形成均增高，但骨吸收大于骨形成，骨形成相对减少，骨改建呈负平衡。动物卵巢切除后引致的骨丢失与人类绝经后骨质疏松症有相似之处［6,7］。本文选用小鼠作模型复制对象，去卵巢后小鼠模型组骨形态计量学指标显著改变，与假手术组比较具有显著意义，表明骨质疏松症动物模型复制成功［8］。

    骨组织形态计量学是评价骨转换与骨结构的最直接最客观的指标。去卵巢动物骨吸收增加而骨形成降低，致使骨量丢失，导致骨质疏松。本实验中，柔毛淫羊藿给药60天，可见动物的骨组织形态计量学指标有明显的改善：柔毛淫羊藿明显提高去卵巢动物的成骨细胞数；明显降低破骨细胞数；明显降低骨皮质厚度；明显增加骨小梁骨细胞数；明显增加骨小梁面积。己烯雌酚作为雌激素替代品治疗骨质疏松已广泛应用于临床，其增加骨形成，抑制骨吸收，降低骨转化率，防止骨丢失的作用，主要有如下机制：（1）降低成骨细胞的Ⅰ型胶原mRNA和破骨细胞（包括破骨细胞前体细胞）的基质金属蛋白酶-9的表达（在骨质疏松时，两基因的表达水平增高），降低骨转换，发挥抗骨质疏松作用［9］；（2）调节骨对甲状旁腺激素PTH的敏感性或减少低钙对甲状旁腺的刺激以减少骨吸收，增加1，25-二羟基维生素D3［1,25-（OH）2D3］ 水平，使肠钙吸收增加，从而强化骨形成；（3）恢复降钙素低基础值及钙对其刺激，抑制骨吸收［10］。柔毛淫羊藿抗骨质疏松症的作用是否也系上述机制，尚待证实。有关药理学研究提示，淫羊藿有拟激素样作用，可使雌性大鼠卵巢、子宫增重，促进鸡胚股骨生长［11］，具有抗骨质疏松功效［12，13］。而具体品种的淫羊藿的作用未见报道，本实验仅研究了柔毛淫羊藿对去卵巢骨质疏松小鼠骨组织形态学方面的影响，初步证实柔毛淫羊藿对去卵巢骨质疏松小鼠具有类似雌激素的治疗作用。柔毛淫羊藿抗骨质疏松的作用机制及其有效成分的进一步药理作用有待研究。

【参考文献】
  1 黄兆胜. 中药学. 北京: 人民卫生出版社, 2002, 433.

2 刘根节. 淫羊藻有效成分的药理作用与临床应用研究进展.中外医疗，2007，19：40-42.

3 鲍加荣，杨继文，李树峰，等.淫羊藿苷对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响.卫生研究，2005，34（2）：191-193.

4 Takano Y，Tanizawa T，Mashiba T，et al．Maintaining bone mass by bisphosphonate ineadronate disodium（YM1 75）sequential treatment after discontinuation of intermittent human parathyroid hormone（1-34） administration in ovarieetomized rats．J Bone Miner Res，l996，2：169-177．

5 张银桃，唐建明，侯亚平，等．骨关节炎与骨质疏松症关系的研究．中国现代医学杂志，1996，6（3）：9-10．

6 Forst HM，Jee WSS．On the rat model of human osteoporosis．Bone Miner,1992，18，227-236．

7 Kalu DN．The ovearieetomized rat as a model of postmenopausal OS．teopenia．Bone Miner，1992，15，175-192．

8 沈薇，隋璐，苏禄晖．实验性骨质疏松症小鼠模型的建立．沈阳医学院学报，2006，8（4）：245-250.

9 赵海波，夏志道，蔡国平，等．雌激素对实验性骨质疏松骨组织I型胶原和基质金属蛋白酶-9的表达的影响．中华老年医学杂志，1999，18（1）：42-44．

10 马正云，邱明才．雌激素与骨代谢．国外医学·内分泌分册，1996，16（1）：19-22．

11 高子范，杨宗智，马克昌，等．淫羊藿注射液对试管内鸡胚股骨生长的促进作用．中西医结合杂志，1985，5（3）：172.

12 李秀英，徐晓玉．淫羊藿苷的药理作用研究进展．云南中医中药杂志，2007，28（6）：45-47．

13 许碧连，吴铁，王晖．淫羊藿总黄酮药理作用的研究现状．中国临床药理学与治疗学，2003，8（1）：115-117．

（编辑：邓 锋）

作者单位：550004 贵州贵阳,贵阳医学院