肥厚型心肌病心肌肌钙蛋白ⅠR145W突变对大鼠心肌细胞钙调控的影响

2008年03月05日 《中华心血管病杂志》-2007年35卷11期 -1000-1004页 医学空间（MEDcyber.com）3月5日消息，该项研究目的是探讨国人新的致肥厚型心肌病（HCM）心肌肌钙蛋白Ⅰ基因突变（cTnⅠ R145W）引起HCM发病的可能机制。方法采用定点突变技术在大鼠cTnⅠ cDNA引入R146W（相当于人R145W）突变，增强型绿色荧光蛋白（EGFP）做报告基因，构建含野生型和突变型大鼠cTnⅠ cDNA的重组腺病毒载体。Langendoff逆流灌注系统分离成年大鼠心肌细胞，无血清法培养后重组腺病毒转染。Western blot检测重组蛋白的表达，全膜片钳技术记录心肌细胞膜L型钙电流，Fura-2／AM孵育后测定细胞内游离钙离子浓度和咖啡因诱导的肌浆网钙释放。实验结果，DNA测序证实R146W突变成功引入大鼠cTnⅠ cDNA。新鲜分离的成年大鼠心肌细胞存活率达70％～80％，无血清培养7天后绝大部分能保持长杆状形态。重组腺病毒转染48h后荧光显微镜下可观察到绿色荧光，cTnⅠ和绿色荧光蛋白单抗均能检测到重组蛋白。与野生型cTnⅠ和正常对照组比较，突变型cTnⅠ组心肌细胞膜L型钙电流峰值明显降低。Fura-2／AM法测定细胞内游离钙离子浓度和咖啡因诱导的肌浆网钙释放，三组之问差异无统计学意义。所以得出结论，含R146W突变的cTnⅠ蛋白可能引起心肌细胞的电生理学重构，进一步研究可探讨肌丝对钙的敏感性及钙调节蛋白表达的改变。