应用干扰RNA体外抑制严重急性呼吸综合征冠状病毒N基因的表达

2006年04月05日 中华传染病杂志2005 Vol.23 No.3 P.166-169 4 （重庆）为了构建绿色荧光蛋白(GFP)与严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒 N蛋白的融合表达载体pEGFP-C1-N以及针对SARS冠状病毒 N基因的小发卡型shRNA表达载体pshRNA-N，观察shRNA对SARS冠状病毒 N基因复制和表达的影响，研究者将构建成功的pEGFP-C1-N与psh RNA-N共转染293细胞，于转染后24、48、72 h观察GFP表达的强弱，采用Western Blot分别检测GFP与N蛋白的表达，逆转录PCR检测N基因的mRNA。结果 pshRNA-N作用组绿色荧光强度明显弱于未干扰组，Western Blot和逆转录PCR结果也证实pshRNA-N对N基因和N蛋白的表达有明显抑制作用，而无关序列的shRNA无此作用。可见针对SARS冠状病毒 N基因的shRNA具有显著和特异的抑制N蛋白表达的作用。