乙型肝炎病毒前S1结合蛋白的筛选和鉴定

2007年08月13日 中华传染病杂志2007年25卷1期20-24 医学空间（MEDcyber.com）8月13日消息，酵母双杂合体系证实MEK1可能是一个前S1结合蛋白。

乙型肝炎是由乙肝病毒引起的一种病毒性肝炎，常常以腹胀、纳差、大便稀或干结等消化道症状为主要特征。

中华传染病杂志一月第一期刊登一项研究，研究者利用PCR扩增HBV前S1基因序列，根据酵母双杂合体系构建饵质粒pAS2-1-preS1，并测定序列；饵质粒转化入酵母菌AH109，Western印迹法证实前S1-BD融合蛋白在酵母细胞中的正确表达。pAS2—1-preS1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞，通过选择性培养及β-半乳糖苷酶活性测定筛选阳性菌落，分离实验排除假阳性克隆，扩增阳性克隆的目的基因并测定序列，查询其同源序列，行交合实验进一步证实目的蛋白同前S1蛋白在酵母细胞中能否特异性结合。

福建医科大学附属协和医院消化科李丹等研究人员研究显示，成功构建pAS2-1-preS1饵质粒，Western印迹法证实转化饵质粒的酵母细胞能正确表达前S1-BD融合蛋白，pAS2—1-preS1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞后，选择性培养出101个菌落，经β-半乳糖苷酶活性测定及分离实验后筛选出1个阳性克隆，其cDNA插入片段与丝裂原活化蛋白激酶-胞外信号调节蛋白激酶（MAPK—ERK）激酶1（MEK1）基因高度同源。交合实验证实MEK1同前S1蛋白在酵母细胞中可特异性结合。

因此可见酵母双杂合体系证实MEK1可能是一个前S1结合蛋白。