猿肾病毒40大T抗原基因永生化大鼠神经前体细胞株的构建

2006年01月27日 中华麻醉学杂志 2005 Vol.25 No.8 P.597-600 6 （武汉）为了建立猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Tag)永生化大鼠神经前体细胞株，为细胞移植治疗和转基因治疗提供稳定的细胞来源。研究者利用脂质体介导的基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染原代培养的新生大鼠神经前体细胞，经嘌呤霉素筛选，阳性克隆扩大培养并连续传代。应用巢蛋白抗体进行细胞鉴定，5%胎牛血清诱导细胞分化后，应用免疫细胞化学法检测其分化能力，观察细胞的形态及其生长状况，绘制细胞生长曲线。用RT-PCR、Southern印迹杂交和免疫细胞化学法检测SV40Tag在转染细胞中的表达。结果转染细胞经筛选培养后获得1个阳性细胞克隆，免疫细胞化学结果显示细胞的巢蛋白和微管相关蛋白2染色为阳性，增殖能力较强。5%胎牛血清可诱导转染细胞分化为微管相关蛋白2阳性和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞。Southern印迹杂交结果显示转染细胞基因组中存在SV40Tag cDNA，并可检测到SV40Tag mRNA及其蛋白的表达。转染细胞经扩大培养，命名为永生化神经前体细胞。贴壁培养的神经前体细胞，群体倍增时间为(22.9±2.7)h，传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响。可见成功地构建了SV40Tag永生化的大鼠神经前体细胞株。