MGMT基因导入对真核细胞保护作用的实验研究

2007年02月12日 中华血液学杂志 2006 Vol.27 No.12 P.817-820 9 （郑州）为了克隆六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)基冈并构建表达载体，导入真核细胞表达，研究MGMT对真核细胞保护作用。研究者 利用RT-PCR克隆人肝细胞MGMT基因并重组构建真核表达载体。脂质体法导入K562细胞及人外周血单个核细胞(PBMNC)，用实时定量PCR法检测目的基因的表达。MTT法检测转基因细胞对烷化剂耐药性的改变。结果 成功克隆人MGMT基凶，转染K562细胞和PBMNC后，转基因组MGMT mRNA表达水平分别是转染空载体组的13.4倍(P＜0.01)和4倍(P＜0.01)。Western blot结果显示MGMT蛋白表达在转基因组中明显高于转空载体组及对照组。耐药性实验结果显示目的基因导入后，K562稳定转染细胞和PBMNC瞬时转染细胞对烷化剂的半数抑制浓度分别提高到原来的7倍和2倍。可见 MGMT基因导入可使真核细胞对烷化剂的耐药性得到不同程度的增强，从而对细胞起到保护作用。