半胱氨酸天冬氨酸3依赖的bcl-2的降解在ATP耗竭诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

2006年03月08日 中华肾脏病杂志 2005 Vol.21 No.11 P.685-688 13 （广州）为了研究ATP耗竭再恢复诱导的肾小管上皮细胞凋亡中，半胱氨酸天冬氨酸(caspase)3激活介导bcl-2降解的作用。研究者使用代谢抑制剂短暂阻断细胞内ATP的生成，诱导细胞凋亡。以Hoechst 33342染色观察凋亡细胞。应用编码人bcl-2 RNA的腺病毒感染细胞，使bcl-2在细胞内高表达。应用流式细胞仪，分析细胞凋亡和坏死的发生情况。以Western印迹检测caspase 3的活化以及bcl-2和bcl-2的降解产物。体外实验观察caspase 3和caspase 3特异性抑制剂DEVD对bcl-2降解产物的影响。结果高表达bcl-2组与对照组比较，细胞ATP耗竭60min、90 min、120 min和再恢复60min后，可减少细胞凋亡50%，P＜0.05。肾小管上皮细胞ATP耗竭时，caspase 3被激活，bcl-2出现降解,细胞内ATP恢复时，bcl-2降解产物继续增多，并出现细胞凋亡。体外应用caspase 3可使bcl-2降解，而caspase3的特异性抑制剂DEVD能明显抑制caspase 3对bcl-2的降解。可见肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复时，caspase 3激活及其介导的bcl-2降解在细胞凋亡中发挥重要作用。