siRNA对宫颈癌细胞系 HPV16 E6基因的作用

2006年05月05日 中国妇产科临床杂志 2005 Vol.6 No.4 P.284-288 6 （北京）为了构建并筛选出最有效的HPV16 E6基因特异的小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)表达载体，观察其对宫颈癌细胞中HPV16 E6基因表达的长期影响，探讨E6基因在宫颈癌发生过程中的分子作用机制，为临床HPV感染及宫颈癌治疗探索新方法。研究者构建Hairpin siRNA质粒，稳定转染宫颈癌SiHa细胞，鉴定转染细胞中的质粒DNA，通过Real-Time RT-PCR检测细胞中HPV16 E6mRNA表达，采用Western-blot检测p53、p21等蛋白的变化。MTT法(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)检测SiHa细胞转染siRNA后细胞增殖曲线。结果HPV16 E6A hairpin siRNA表达载体转染人宫颈癌SiHa细胞，可以在细胞内长期表达siRNA，有效抑制细胞内HPV16 E6基因的表达。E6A siRNA能抑制细胞生长，作用持续达4个月以上。可见利用siRNA表达载体抑制整合在细胞中的外源HPV E6病毒癌基因可能是治疗HPV感染和宫颈癌的一种新的理想方法。