反相高效液相色谱法测定人血浆中万古霉素浓度

（中南大学湘雅医院药剂科 长沙 410008）

　　万古霉素（Vancomycin）属三环糖肽类抗生素，对革兰氏阳性细菌有强大抗菌作用，尤其对目前临床较为棘手的严重耐药金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有较好疗效，且不易诱导细菌产生耐药性，因而深受临床重视。但其具有耳、肾毒副反应，临床应用时常需进行血药浓度监测, 特别是老年患者和肾功能不全者, 通过监测来避免耳、肾功能损害。万古霉素血浆浓度测定方法已报道的有微生物法、免疫法和高效液相色谱法, 有关 高效液相色谱法国内仅张氏做过报道，但色谱峰过宽且拖尾，结果不能令人满意。本文通过实验建立的反相高效液相色谱法测定血浆中万古霉素浓度，同文献相比具有分离效果好、色谱峰形优、灵敏度高、方法简单快捷。可用于万古霉素临床血浓度监测及体内药代动力学研究。 1 材料与方法 1.1 药品与试剂 盐酸万古霉素（美国Lilly公司），甲醇为色谱纯，三乙胺和四氢呋喃均为分析纯试剂。 1.2 仪器 HEWLETT--PACKARD 1100型高效液相色谱仪，HP35900D化学工作站。 1.3 色谱条件 色谱柱为Hypersil C18 ODS柱 4.0 ×250mm ，流动相为甲醇∶水（20∶80）含0.1%三乙胺和1%四氢呋喃，流速为1.0ml/min，检测波长230nm，灵敏度0.01AUFS。 1.4 标准溶液配制 精确称取盐酸万古霉素适量，加入重蒸馏水溶解，配成1mg/ml标准溶液，置40C冰箱备用。 1.5 样品处理 取血浆0.2ml于离心管内，加入10%三氯醋酸溶液0.2ml，旋涡震荡2min，以3000r/min速度离心10min，取上清液20μl进样。 2 实验结果 2.1 色谱与分离 本实验条件下，样品处理方法简单，峰形较尖锐，分离效果好，血浆内源性杂质对阿霉素测定无干扰，色谱图见下图。

　　2.5 临床应用 患者李某全身烧伤80%，血培养出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，静脉给予万古霉素500mg q8h。第二天测定血中万古霉素峰、谷浓度分别为4.75μg/ml、20.17μg/ml，结合临床认为谷浓度偏低，不能保证全天都有较好的杀菌效果，故改为500mg q6h。第四天再次测定血中万古霉素峰、谷浓度分别为13.67μg/ml、28.62μg/ml，症状一直控制较好，同时密切观察耳、肾功能。再次血培养结果呈阴性，第七天停药，期间未出现耳、肾功能损害，疗效满意。 3 讨论 3.1 本实验建立的反相高效液相色谱法测定血浆中万古霉素浓度方法，样品处理方法简便、分离效果好、灵敏度高、方法准确稳定，经临床测试表明能较好地应用于阿霉素的体内样品分析。 3.2 万古霉素为糖肽类化合物，分子量1486，流动相采用甲醇与水组合拖尾严重。本文作者曾按国外文献方法配制流动相，洗脱时色谱峰较宽且同样存在拖尾现象，结果不能令人满意。经摸索发现加入三乙胺和四氢呋喃可以降低色谱柱对万古霉素的强吸附作用，使得峰形大大改善，拖尾现象得以抑制。本文采用含0.1%三乙胺和1%四氢呋喃的甲醇∶水（20∶80）为流动相，得到较满意色谱行为。 3.3 耳毒性是万古霉素最严重的毒性反应，发生与血药浓度过高有关，〉40μg/ml产生耳鸣，〉80μg/ml持续数日可致耳聋。同时新制剂虽降低了肾毒性，但危险性仍存在。临床常通过血药浓度监测来避免发生。本文第二次监测结果显示谷浓度有所偏高，但考虑患者为高度烧伤且血培养为严重耐药金黄色葡萄球菌，此时峰浓度并不是太高，故未再调整剂量，只是密切观察耳、肾功能，并在感染控制后及时撤药，取得满意疗效。