HPLC法测定辛伐他汀及其片剂的含量

　　摘要　目的：建立用HPLC法测定辛伐他汀及其片剂含量的方法。方法：采用Alltima ODS柱(250 mm×4.6 mm)，于238 nm下检测，流动相乙腈-0.1%磷酸(60∶30)。结果：线性范围0.5～5 μg（r=0.9998），最低检测限为0.3 ng，平均回收率为99.1%，RSD为0.82%。结论：方法重现性好，准确度高，适于制剂含量测定及稳定性研究。
　　关键词　辛伐他汀；高效液相色谱法
　　中图分类号：R917　　　文献标识码：A　　　
文章编号：1006-0103(2000)03-0205-02

　　辛伐他汀(simvastatin)为无活性内酯，经口服吸收后水解为相应的β-羟酸结构，对HMG-CoA还原酶有抑制作用，可降低肝脏胆固醇的合成及调节低密度脂蛋白受体、促进低密度脂蛋白清除而降低细胞内胆固醇水平^［1］。临床用于治疗高胆固醇血症，冠心病，可明显降低高脂血症患者血浆中的甘油三酯，提高高密度脂蛋白水平。目前除默沙东的舒降之外，国内尚无制剂生产，亦无含量测定的报道。

1　实验部分

1.1　仪器与试药
　　岛津LC-6A型高效液相色谱仪配岛津SPD-6AV型紫外检测器、岛津C-R6A数据处理仪及WDL-95色谱工作站（中国科学院大连化学物理研究所）；美国Orion Research EA-940型离子分析仪；岛津UV-2201型紫外分光光度计。乙腈（色谱纯，浙江黄岩化工试验厂)；磷酸（分析纯，北京化工厂)；冰醋酸，氢氧化钠（分析纯，北京化工厂）；蒸馏水（药用，自制）。辛伐他汀原料（批号970104、970114、970118），片剂（批号970308、970309、970310）(广东彼迪药业有限公司)；辛伐他汀对照品（批号53776-D，美国默沙东公司)；洛伐他汀对照品(批号970114，含量99.86％，北京市药品检验所)。
1.2　色谱条件
　　美国Alltima ODS柱(5μm，250 mm×4.6 mm)，检测波长238 nm，AUF 0.02,流动相乙腈-0.1％磷酸（60∶30）用0.45 μm微孔滤膜过滤并脱气,流速1.5 ml^．min^-1。
1.3　溶液的制备
　　取蒸馏水900 ml，加冰醋酸30 ml，用20％氢氧化钠溶液调节pH4.0，加水至足量，搅匀即得醋酸-醋酸钠缓冲液；取800 ml乙腈，加醋酸-醋酸钠缓冲液200 ml，搅匀即得溶解液；精取干燥至恒重的辛伐他汀对照品62.5 mg，在50 ml量瓶中用溶解液稀释至刻度，配成1.25mg^．ml^-1的辛伐他汀标准溶液,冷藏备用；精取干燥至恒重的洛伐他汀对照品25.05 mg，在50 ml量瓶中用溶解液稀释至刻度，制成0.501 mg^．ml^-1的洛伐他汀标准溶液，冷藏备用。精取样品（片剂20片研细）相当于辛伐他汀40 mg，在50 ml量瓶中加溶解液（片剂超声30分钟）稀释至刻度，精密吸取续滤液5 ml，在25 ml量瓶中加溶解液稀释至刻度，即得样品溶液。
1.4　线性关系
　　精取辛伐他汀标准溶液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 ml，分别置25 ml量瓶中，用溶解液定容，进样20 μl，取两次均值，以进样量为X，峰面积为Y进行线性回归，得回归方程Y＝6334.0＋371798.9X，r＝0.9998，线性范围0.5～5μg。
1.5　方法考察
1.5.1　最小检出限　调节灵敏度为0.002，信噪比为2时，最小检出量为0.3 ng。
1.5.2　精密度　分别用50 μg^．ml^-1标准溶液进样20 μl及样品溶液进样10 μl，每隔1 h进样1次共5次，日内RSD为0.62％与1.06％，每24 h进样1次共5次，日间RSD为1.19％与1.47％。
1.5.3　回收率　精取干燥至恒重的辛伐他汀对照品20 mg，共6份，按处方比例分别加入辅料，在100 ml量瓶中用溶解液定容，取续滤液10 ml，在25 ml量瓶中用溶解液定容，摇匀，进样20 μl，以辛伐他汀80μg^．ml^-1的标准溶液为外标,结果为99.8%、99.6%、100.2%、98.7%、98.1%、98.4%，平均回收率为99.1％，RSD为0.82％。
1.5.4　色谱柱柱效、分离度及拖尾因子　用溶解液将辛伐他汀标准液稀释为80 μg^．ml^-1和洛伐他汀标准液50 μg^．ml^-1，进样20 μl，记录色谱图(图1)，计算分离度为R=6.1，拖尾因子T＝1.24，理论板数为10230。

图1　辛伐他汀与洛伐他汀的色谱图
Fig 1 Chromatogram of Simvastatin and Lomvastatin mixture
1 Blank（溶剂） 2 Simvastatin（辛伐他汀） 3 Lovastatin（洛伐他汀）

1.6　样品的含量测定
　　将原料及片剂的样品溶液，进样10 μl，进样5次取平均值，结果以标示量的百分数表示(表1)。

表1　原料及片剂样品的含量结果（n=5）
Table 1 Samples　assay results（n=5）

2.1　片剂样品和辅料用紫外分光光度计扫描，样品在231、238、247 nm有吸收峰，辅料无吸收，选最大吸收波长238 nm作检测波长，扫描曲线见图2。

图2　辛伐他汀片的紫外扫描图
Fig 2 Ultraviolet spectrum of Simvastatin tablets

2.2　样品中存在洛伐他汀，参照美国药典^［2］所收载的辛伐他汀含量测定项，本试验采用的流动相较美国药典比例略有调整，由60∶40变成60∶30，减少了水的用量，使保留时间缩短，适于快速分析。其理论板数（N）大于2000，与洛伐他汀的分离度大于3，拖尾因子不大于2，符合美国药典的要求。
2.3　辛伐他汀片剂分别采用溶解液、乙腈、流动液作为溶解介质，超声30分钟提取，含量分别为98.2%±0.94%、95.3%±1.43%、69.7%±5.45%（n=3），以采用乙腈和醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.0）配成的溶解液提取效果最好。

作者简介：闫小燕，女，学士，主管药师，从事医院药学工作。
闫小燕（卫生部北京医院药剂科，北京100730）　
曹国颖（卫生部北京医院药剂科，北京100730）　
何笑蓉（卫生部北京医院药剂科，北京100730）　
胡欣（济南市千佛山医院，山东 济南250000）　
谷大建（济南市千佛山医院，山东 济南250000）

参考文献

1，Scandinavian Simvastatin Survival Study Group. Randomised trial of cholesterol lowering in 4444 patients with Coronary heart disease :the Scandinavian Simvastatin Survival Study(4S)［J］.Lancet，1994，344:1383
2，USP.NF (Ⅲ)［S］.1995. 2979

收稿日期：1999-11