随着饲料工业的发展，饲料添加剂维生素B12剂型也日益多样化，采用紫外比色法为基础的国标方法，已不能适用于新剂型饲料添加剂维生素B12的分析。而高效液相色谱法以其分离效果好、分析速度快和结果准确等优点，为维生素B12的分析测定提供了一种快速可靠的方法。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
仪器：HPLC 为美国Waters高效液相色谱仪，Millennium操作系统，717plus自动进样器，600E高压泵，486紫外可调波长检测器
试剂：乙腈 色谱纯
正磷酸(85%) 优级纯
水为超纯水
1.2 色谱条件
色谱柱：μBondpak NH2 3.9×300mm
流动相：配置0.3%的正磷酸水溶液，取3ml正磷酸用超纯水定容至1000ml，过0.45μ滤膜。取上述溶液260ml用乙腈定容至1000ml混合，脱气。
柱温：40℃
流速：1.7ml/min
检测波长361nm
1.3 标准配制
标准储备液：称取经过干燥的VB12标准品100mg置于100ml棕色瓶中，用流动相定容至刻度，浓度为1mg/ml。
标准工作液：取2ml标准储备液，用流动相定容至50ml，浓度为40μg/ml。
1.4 样品制备
称取含维生素B12约200μg的样品，置于50ml棕色容量瓶中，用流动相定容，超声提取10min，再离心10min，取上清液过0.45μ滤膜，上机。
2 结果与讨论
用上述方法测定标示量为1%的饲料添加剂维生素B12，检测结果为0.998%，相当准确。
在测定中需注意：①试验应尽量避免自然光和氖灯，否则氰钴氨可能转变成羟基钴氨。②维生素B12容易吸附于过滤纸上，故过滤时至少取5ml上清液，弃去最初2ml滤液。
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作者：
2007-5-18