紫苏子中α-亚麻酸的气相色谱法测定

目的：建立紫苏子有效成分α-亚麻酸的气相色谱测定法。方法：色谱条件为15%丁二酸二乙二醇聚酯(DEGS)色谱柱，柱温182 ℃，FID检测器，内标为十七碳酸乙酯。结果：α-亚麻酸乙酯浓度在0.429 2～2.146 0 mg^.mL^-1范围内呈线性关系(r=0.999 9)，加样平均回收率为102.8%(RSD=0.73%)。结论：该法简便，灵敏，易操作，为紫苏子生药质量评价提供了一个新的实用方法。
关键词　紫苏子　α-亚麻酸　气相色谱法

紫苏子为唇形科植物紫苏Perilla frutescens(L.)Britt.的干燥成熟果实，具有降气消痰，平喘，润肠之功能，是目前发现最富含α-亚麻酸的植物资源^［1，2］。现代药理研究结果表明，α-亚麻酸具有降血脂，降血压，抗血栓，抗过敏，抗癌^［3～7］等生物活性。采用气相色谱内标法测定其有效成分α-亚麻酸的含量未见文献报道。本文建立了以十七碳酸乙酯为内标，气相色谱法测定其α-亚麻酸的含量，并对14个产地的紫苏子样品进行了测定。
1　仪器与试药
　　日本岛津GC-14A气相色谱仪；C-R4A数据处理机。药材分别采集于湖北松滋等14个不同产地，见表1，经鉴定为唇形科植物紫苏Perilla frutescens(L)Britt.的干燥成熟果实。α-亚麻酸乙酯：本实验室自制，并经MS、¹H-NMR和¹³C-NMR鉴定为9，12，15-octadecatrienoic acid ethyl ester,气相色谱峰面积归一化法测得纯度为100%；十七碳酸乙酯：SIGMA公司产品；所用试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　丁二酸二乙二醇聚酯(DEGS)为固定相涂布于Chromosorb W(60～80目)上，涂布浓度15%，柱长2 m，内径3 mm,柱温182 ℃。氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度215 ℃。进样口温度250 ℃。氮气流速30 mL^.min^-1，氢气流速45 mL^.min^-1，空气流速500 mL^.min^-1。在本实验的色谱条件下，见图1，理论塔板数以α-亚麻酸乙酯峰计算不低于3 000，α-亚麻酸乙酯峰和十七碳酸乙酯峰均与相邻组分色谱峰得到完全分离，分离度大于1.5。

图1　气相色谱图
A.对照品+内标　B.供试品　C.供试品+内标
1.内标物　2.α-亚麻酸乙酯

2.2　对照品溶液的配制　取α-亚麻酸乙酯适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL约含2 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.3　内标溶液的配制　取十七碳酸乙酯适量，精密称定，加正己烷制成每1 mL约含2 mg的溶液，作为内标溶液。
2.4　样品的提取及供试品溶液的配制　取本品约1 g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90 ℃)80 mL，置水浴上回流提取4 h，回收石油醚至尽。残留物加正己烷适量使溶解，置于10 mL具塞刻度试管中，加正己烷稀释至3.0 mL，加无水乙醇2.5 mL，加0.8 mol^.L^-1氢氧化钾乙醇溶液2.5 mL，摇匀，静置30 min，加饱和氯化钠溶液2.0 mL，取上清液1.0 mL，无水硫酸钠脱水，置于25 mL量瓶中，加正已烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.5　定量校正因子测定　精密量取对照品溶液0.8，1.0，1.2 mL分别置于具塞刻度试管中，吹干，精密加入正己烷至1.0 mL，精密加入内标溶液1.0 mL，摇匀。分别进样测定3次，每次1 μL，测得定量校正因子为1.100，RSD=1.1%(n=9)。

2.6　标准曲线的绘制　精密量取对照品溶液0.4,0.8,1.2,1.6,2.0 mL分别置于具塞刻度试管中，吹干，精密加入正己烷至1.0 mL，精密加入内标溶液1.0 mL，摇匀。分别进样测定，每次1 μL。以α-亚麻酸乙酯浓度为横坐标，α-亚麻酸乙酯与内标峰面积之比为纵坐标进行线性回归。结果表明α-亚麻酸乙酯浓度在0.429 2～2.146 0 mg^.mL^-1范围内呈良好的线性关系，其线性回归方程为：
Y=0.887 32 X+0.000 26　r=0.999 9
2.7　精密度和重现性试验　对同一供试品溶液连续测定6次，测得α-亚麻酸的平均含量为0.138 7 g^.g^-1，RSD=0.39%。对同一样品依法独立测定6次，测得α-亚麻酸的平均含量为0.144 3 g^.g^-1，RSD=3.6%。
2.8　加样回收率试验　取已知含量的样品约0.5 g，5份，精密称定，分别精密加入α-亚麻酸乙酯对照品溶液37.5 mL(2.15 mg^.mL^-1)，依法测定，测得平均加样回收率为102.8%，RSD=0.73%。
2.9　样品测定　精密量取供试品溶液和内标溶液各1.0 mL，摇匀，量取1 μL进样。依法测定14个不同产地的紫苏子样品，结果见表1。
3　讨论
3.1　曾试验比较了三氟化硼催化酯化法^［8］、硫酸催化酯化法^［9］、四甲基氢氧化铵催化酯化法^［10］和快速脂肪酸酯化法^［11］对其脂肪油衍生化的效果，结果表明快速脂肪酸酯化法乙酯转化率最高，故选用此法作为乙酯化方法。

表1　不同产地紫苏子中α-亚麻酸含量(g^.g^-1)

3.2　测定结果表明不同产地的紫苏子样品中α-亚麻酸含量存在着差异，以产于黑龙江宁安的样品含量最高，江苏无锡的样品含量最低，是否与气候等生态环境因素有关，有待探讨。

国家九五科技攻关资助项目
李振宝、曹海龙，延边大学药学院九五级实习生；叶龙凤，长春中医学院中药系九五级实习生。
王威（吉林省中医中药研究院　长春　130021）
闫喜英（吉林省中医中药研究院　长春　130021）
李振宝（吉林省中医中药研究院　长春　130021）
叶龙风（吉林省中医中药研究院　长春　130021）
曹海龙（吉林省中医中药研究院　长春　130021）
牛志多（吉林省中医中药研究院　长春　130021）
王永奇（大连大学　大连　116622）
王玉光（卫生部长春生物制品研究所　长春　130062）