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银黄口服液是一种清热解毒、消炎药物，用于上呼吸道感染、急性扁桃体炎、咽炎等症。由金银花、黄芩提取物经加工而成。主要化学成份是绿原酸和黄芩甙，现已被《中国药典》1995年版一部收载，含量测定方法是分光光度法。本文利用高效液相色谱法(HPLC)，使绿原酸和黄芩甙经分离而直接测定，更好地消除了两组分之间和其它未知成分干扰，因而测定结果更加可靠。
1 仪器、试药与药品
Watcrs 501泵、484检测器、7725进样品、国产色谱工作站。乙腈(色谱纯)枸橼酸(分析纯)三乙胺(分析纯)重蒸馏水。绿原酸、黄芩甙对照品(中国药品生物制品检定所)。银黄口服液、金银花、黄芩(市售)。
2 色谱条件
色谱柱:Nova-Pack C18 200mm×4.6mm 4μ；流动相:0.05mol/L枸橼酸(pH=4,用三乙胺调)-乙腈(39∶21)流速:1.0ml/min;检测波长:324nm。
3 标准溶液的配制
3.1 标准贮备液制备：分别精密称取减压干燥后的绿原酸和黄芩甙适量，置同一量瓶中，加流动相溶解成浓度绿原酸约为1mg/ml和黄芩甙约为2mg/ml的溶液。
标准溶液制备：精密量取标准贮备液适量，加流动相稀释成绿原酸约为20μg/ml和黄芩甙约为40μg/ml混合的溶液，过滤备用。
3.2 线性范围：分别精密量取标准贮备液适量，加流动相稀释成绿原酸为10,20,30,40和50μg/ml和黄芩甙为20,40,60,80和100μg/ml的溶液。精密量取适量注入色谱仪中，按上述色谱条件记录色谱图，测得峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程和相关系数(见表1)。
表1 绿原酸和黄芩甙的回归方程和相关系数
|
成 份 |
回归方程 |
相关系数 |
线性范围(μg/ml) |
|
绿原酸 |
Y=74.63x+234.0 |
0.9981 |
10～50 |
|
黄芩甙 |
Y=26.32+607.9 |
0.9976 |
20～100 |
3.3 回收率试验：精密量取已测得含量的银黄口服液5ml置50ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。精密量取1ml置100ml量瓶中，再精密加入标准贮备液1ml,加流动相至刻度，摇匀，过滤；照样品测定项下，测定并计算得：绿原酸和黄芩甙的平均回收率分别为98.2%(RSD=1.05%)和98.7%(RSD=1.32%)(n=5)。
3.4 样品测定：精密量取银黄口服液2ml置100ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，过滤，作供试溶液备用。
精密量取标准溶液和供试溶液适量，注入色谱仪中，按上述色谱条件，记录色谱图，测得峰面积，按峰面积外标法计算，另以药典方法测定其含量(见表2)。
3.5 重现性考察：取标准溶液重复精密进一定量，连续进样9次，测峰面积，得绿原酸和黄芩甙的RSD分别为0.39%和0.42%。
表2 银黄口服液2种含量测定法的比较
|
批 号 |
本文方法 |
|
药典方法 | ||
|
绿原酸 |
黄芩甙 |
绿原酸 |
黄芩甙 | ||
|
96 |
11.4 |
22.9 |
|
12.5 |
24.5 |
|
96 |
11.1 |
22.9 |
|
12.0 |
24.3 |
|
97 |
10.6 |
23.0 |
|
12.3 |
24.5 |
|
97 |
11.9 |
23.3 |
|
12.9 |
25.0 |
|
97 |
11.8 |
23.3 |
|
12.6 |
25.1 |
4 讨 论
4.1 在样品谱图中可见，还有5～6个未知成分的峰，而这些未知成分说明在紫外区有吸收，这就可能影响直接用光谱法测定，而本文的方法则可消除其影响。
4.2 本文在选择测定波长时，曾先分别测得绿原酸和黄芩甙的紫外吸收光谱图，结果在324nm处两成分都有较大的吸收。因此，选择324nm为检测波长，以便有较好的检测灵敏度。
作者单位：杨月春 湖州 313000 浙江湖州市第二人民医院
戴其昌 湖州 313000 浙江湖州市药品检验所