大豆及谷物中氟磺胺草醚残留量的测定

1　范围

本标准规定了大豆及谷物中氟磺胺草醚残留量的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于大豆及谷物中氟磺胺草醚残留量的测定。

2　原理

　　样品中氟磺胺草醚在酸性条件下用有机溶剂提取，经液-液分配及柱净化除去干扰物质后，以高效液相色谱-紫外检测器测定，根据色谱峰的保留时间定性，外标法峰高定量。

3　试剂

3.1　甲醇(色谱纯)。
3.2　乙醚:重蒸馏。
3.3　三氯甲烷。
3.4　净化柱:硅镁吸附剂色谱预处理小柱，使用前先用5mL三氯甲烷淋洗。
3.5　盐酸(83mL/L):吸取8.3mL浓盐酸，加水稀释至100mL。
3.6　氢氧化钠溶液(4.0g/L):称取0.4g氢氧化钠，溶于水中，稀释至100mL。
3.7　硫酸钠溶液(20g/L):称取20g硫酸钠，溶于水中，稀释至1000mL，用氢氧化钠溶液(3.6)调pH=11。
3.8　丙酮溶液:取980mL丙酮(重蒸馏)，加20mL盐酸。
3.9　甲醇+三氯甲烷(3+7)。
3.10　高效液相色谱流动相(甲醇+0.01mol/L乙酸钠=60+40 pH=3.0):称取0.544g结晶乙酸钠( *H3COONa·3H2O)，溶于水中，稀释至400mL,加600mL甲醇(3.1)，混匀，SC磷酸(优级纯)调pH=3.2,经0.5μm滤膜过滤，超生波脱气。流速1.0mL/min。
3.11　氟磺胺草醚标准储备溶液:准确称取氟磺胺草醚0.10000g，置于100.0mL容量瓶中。加甲醇(3.1)溶解后定容至刻度；此溶液1.00mL含1.00mg氟磺胺草醚。
3.12　氟磺胺草醚标准中间溶液:吸取5.0mL氟磺胺草醚标准储备溶液(3.11)于50.0mL容量瓶中，加甲醇(3.1)定容至刻度；此溶液1.00mL含100.0μg氟磺胺草醚。

4　仪器

4.1　高效液相色谱仪
4.1.1　紫外波长检测器:测定波长290nm,0.04 AUFS。
4.1.2　色谱柱:十八烷基硅胶键合相，柱长200mm,内径4.6mm。
4.2　振荡器。
4.3　电热恒温水浴。
4.4　具塞三角瓶:250mL。
4.5　过滤器具:玻璃砂芯漏斗(G3，100mL)，抽滤瓶(100mL)。
4.6　分液漏斗:250mL。
4.7　玻璃注射器:10mL。

5　分析步骤

5.1　样品处理
5.1.1　提取:将样品粉碎过20目筛、混匀。称取约20g试样，精确至0.001g，置于三角瓶(4.4)中，加入100mL丙酮溶液(3.8)，于振荡器上振摇15min，静置分层，取上层溶液用过滤器具(4.5)过滤。
5.1.2　净化:量取60mL滤液于分液漏斗中，加入100mL硫酸钠溶液(3.7)，用氢氧化钠溶液(3.6)调pH=10-11，加入50mL乙醚振摇，静置分层，弃去上层乙醚。
下层溶液用盐酸溶液(3.5)调pH=1-2，加入50mL乙醚振摇2min，静置分层，收集乙醚层，下层溶液再用50mL乙醚振摇一次，合并乙醚层，静置15min，排净水层，放入蒸发皿中，置于电热恒温水浴上蒸至尽干。
用6mL三氯甲烷分三次溶解残渣，合并移入已接好净化柱(3.4)的注射器(4.7) 中，推动注射器使样液缓慢通过净化柱，用10L三氯甲烷淋洗　净化柱，弃去淋洗液， 用20mL甲醇+三氯甲烷(3.9)洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置于电热恒温水浴上蒸至尽干，用少量甲醇(3.1)多次溶解残渣于刻度离心管中，最终定容至1.0mL供液相色谱分析。
5.2　测定
5.2.1　液相色谱参考条件:见3.10，4.1。
5.2.2　绘制校准曲线:分别吸取0.5、1.0、2.0、4.0、8. *mL氟磺胺草醚标准中间溶液(3.12)于5支100.0mL容量瓶中，加甲醇(3.1)稀释至刻度， 4K标准系列的氟磺胺草醚浓度分别为0.5、1.0、2.0、4.0、8.0μg/mL。取各浓度标准10μL进样，以氟磺胺草醚的浓度为柄坐标，峰高为纵坐标绘制校准曲线。
5.2.3　校准曲线:氟碘胺草醚校准曲线见附图1中图1。
5.2.4　色谱分析:取10μL样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高， 用保留时间确定氟碘胺草醚，根据峰高，从校准曲线上查出氟碘胺草醚含量。
5.2.5　色谱图:氟磺胺草醚标准色谱图见附图1中图2。

6　结果

6.1　计算

C1 . V0
C=------------------------- 
V1 
m . -------
Va

式中: C—样品中氟磺胺草醚的含量，mg/kg。
C1—相当于标准的含量，μg/mL。
V0—净化液定容体积，mL。
V1—量取过滤溶液体积，mL。
V2—提取溶液体积，mL。
m—试样的质量,g。

6.2　精密度和准确度
　对添加氟磺胺草醚浓度范围0.05～0.25mg/kg的大豆、玉米、高梁、小麦、大米等样品进行重复测定，相对标准差为3.8～9.0%，回收率为88.0～97.5%。 
6.3　检出限和标准曲线线性范围
　 仪器检出限2.0ng，方法检出限0.02mg/kg。标准系列浓度0.5μg/mL～32.0μg/mL其相关系数r=0.99998。