用福立液相色谱仪检测奶粉中的三聚氰胺

摘要：本文采用浙江福立分析仪器有限公司生产的FL2200高效液相色谱仪对奶粉中的三聚氰胺进行检测，建立了奶粉中三聚氰胺的高效液相色谱法，最小检测浓度达0.004mg/L，回收率在91.2%～100.5%之间，峰面积的RSD为0.421% ，有良好的线性关系（r=0.9996），具有快速、准确、高效的特点。

      三聚氰胺，简称三胺，分子式C3N6H6，是一种重要的氮杂环有机化工原料。由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素，而普通的全氮测定法测奶粉和食品中的蛋白质含量时不能排除这类伪蛋白氮的干扰，因而一些厂商为了能低成本而添加这种化工原料，以提高产品中蛋白质含量。《国际化学品安全手册》第三卷和国际化学品安全卡片说明：长期或反复大量摄入三聚氰胺可能对肾与膀胱产生影响，导致产生结石。近期的“三鹿奶粉”事件，就是因为不法分子掺卖混有三聚氰胺的奶粉，导致许多婴儿肾结石，造成了严重的后果。本文采用浙江福立分析仪器有限公司生产的FL2200高效液相色谱仪建立奶粉中三聚氰胺快速、准确的检测方法。

1、材料和方法
1.1主要仪器和试剂
      FL2200高效液相色谱仪；
      高速离心机；
      超声波震荡仪；
      涡旋混合器；
      分析天平（万分之一）；
      溶剂过滤器（带0.45um有机、水系过滤膜和真空泵）；
      乙腈（HPLC级）；
      三聚氰胺（≥99.0%）；
      柠檬酸（分析纯）
      庚烷磺酸钠（色谱级）
      水（二次蒸馏水以上）

1.2 色谱条件：
      色谱柱  Venusil ASB C18 4.6*250mm 5um
      流动相  乙腈：10mM/L柠檬酸+10mM/L庚烷磺酸钠缓冲液=15：85（pH=3）
      检测波长 240nm
      柱温  30℃
      流速 1ml/min

2、实验部分
2.1标样测定
      三聚氰胺标准溶液：称取三聚氰胺标样10.0mg ，加稀释液（稀释液为乙腈：水=76：24）溶解定容100ml，即得浓度为100mg/L三聚氰胺标样溶液。将浓度为100mg/L的三聚氰胺标准溶液分别用水稀释成浓度为1mg/L、5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L、50mg/L的标准品，过0.45um过滤头过滤，保存待测。
2.1.1 重复性
      取浓度为20mg/L的标准溶液，重复进样5次，可得如下表
      表1 浓度为20mg/L的重复性

      图1  五次谱图叠加

2.1.2 线性实验
      取浓度为1mg/L、5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L、50mg/L的标准品分别作样，并计算线性范围。

图2 三聚氰胺线性曲线

      可得：W=-1.38198E-5+2.32955E-10*A；R2=0.99964
      实验表明：三聚氰胺在1-50ppm间，有良好的线性。
2.1.3 三聚氰胺最小检测浓度
      三聚氰胺的最小检测浓度为0.004mg/L

   图3 三聚氰胺的最小检测浓度

2.2空白实验        
      称取0.1g水于10ml具旋盖的塑料离心管中，加入5ml乙腈水（1：1），在旋涡混合器上混匀5min，超声波震荡30min，再在旋涡混合器上混匀5min，离心20min（10000r），取出上清液过滤，移取2ml，加入6ml 0.1mol/L盐酸，混匀，过0.45um过滤头过滤后进样分析，无峰。

2.3 样品前处理
      随即抽取市面上的奶粉，进行处理分析。
      称取0.1g奶粉样品于10ml具旋盖的塑料离心管中，加入5ml乙腈-水溶液（1：1），在旋涡混合器上混匀5min，超声波震荡30min，再在旋涡混合器上混匀5min，离心20min（10000r/min），取出上清液过滤，移取2.0ml，加入6ml 0.1mol/L盐酸，混匀，经0.45um滤膜过滤后上机分析。
表2 某厂家某些批次奶粉中的三聚氰胺的含量

图4某厂家某批次的样品图谱

2.4 回收率实验  
      称取0.1g奶粉样品于10ml具旋盖的塑料离心管中，加入乙腈-水溶液（1：1），分别加入浓度为1mg/L三聚氰胺标准溶液1ml、2ml、3ml，分别加入浓度为10mg/L三聚氰胺标准溶液1ml、2ml、3ml，分别加入浓度为20mg/L三聚氰胺标准溶液1ml、2ml、3ml在旋涡混合器上混匀5min，超声波震荡30min，再在旋涡混合器上混匀5min，离心20min（10000r/min），取出上清液过滤，移取2ml，加入6ml 0.1mol/L盐酸，混匀，过0.45um过滤头过滤后分析。
表3 回收率实验表