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快速溶剂萃取（ASE）是加快巧克力产品中脂肪含量测定的新型技术，而且可以大大减少有机溶剂消耗。ASE利用加温、加压以提高萃取动力学，从而减少萃取时间以及溶剂消耗。现有测定巧克力中脂肪的方法耗力，耗时且需要大量的有机溶剂。例如，Mojonnier醚萃取方法需要2-3小时，消耗溶剂110mL，且需要实验室工作人员在大部分萃取时间均在场。采用快速溶剂萃取，相应的萃取时间和溶剂消耗量分别减少至18min和20 mL。与其它现有方法相比，ASE的萃取结果更优或者相当。进一步说，智能化的ASE萃取过程在无人看管时最多可萃取24个样品。
在本应用文献中，采用ASE200萃取烘烤巧克力，牛奶巧克力和可可粉中的脂肪。萃取结果与Mojonnier方法（AOAC方法922.06）相当。
仪器
Dionex ASE200 快速溶剂萃取仪，带有11mL不锈钢萃取池
纤维素滤膜（P/N 049458）
分析天平（至少精确到0.0001g）
研钵，杵（Fisher Scientific）
N-EVAP®溶剂蒸发器（Organomation Associates）
试剂 HydromatrixTM硅藻土（Varian）
溶剂 石油醚（农残级；Fisher Scientific）
萃取条件
﹡溶剂：石油醚100% ﹡温度： 125℃
﹡系统压力：1500psi ﹡加热时间： 6min
﹡静态时间： 3min ﹡冲洗体积： 60％
﹡吹扫时间： 60秒 ﹡循环次数：3次
﹡总萃取时间：18min ﹡溶剂总量： 20mL
样品
Hershey’s®烘烤巧克力条，牛奶巧克力条以及可可粉购自当地食品店。
样品处理
烘烤巧克力条：
细磨烘烤巧克力样品。称量1g研磨过的巧克力样品与2g硅藻土在研钵里再次研磨、混合均匀。在11mL的萃取池的出口放置一片纤维素滤膜，而后将样品和硅藻土的混合物装入萃取池中。
牛奶巧克力条：
细磨牛奶巧克力样品。称量1g研磨过的巧克力样品与2g硅藻土在研钵里再次研磨、混合均匀。在11mL的萃取池的出口放置一片纤维素滤膜，而后将样品和硅藻土的混合物装入萃取池中。
可可粉
在11mL的萃取池的出口放置一片纤维素滤膜。在萃取池中装入1g硅藻土，然后在硅藻土层上加入1g可可粉，然而用搅拌棒将可可粉和硅藻混合均匀（若将可可粉放在研钵中研磨，样品会损失。）
萃取程序
收集瓶称重、标识好后置于ASE收集托盘中。将萃取池装在ASE萃取池腔中。按照“萃取条件”部分设置方法后开始萃取。当萃取完成后，将收集瓶移出，在氮气保护下在N-EVAP®中蒸干。每一样品在烘箱中102 ºC干燥30min。收集瓶在室温下冷却后，再次称重。
结果与讨论
表1和表2总结了分别采用ASE和Mojonnier萃取烘烤巧克力，牛奶巧克力中脂肪的实验结果。两种方法的样品回收率相当。然而Mojonnier萃取耗时2.5h，消耗溶剂140mL；而ASE萃取耗时18分钟，消耗溶剂仅需20 mL。
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表1 烘烤巧克力中脂肪*的回收率 ASE vs Mojonnier 方法（n=3） | ||
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ASE |
Mojonnier |
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平均值 |
52.80 |
51.69 |
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偏差 |
0.35 |
0.26 |
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相对标准偏差 |
0.67 |
0.50 |
%脂肪=（残留/样品质量）×100
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表2 牛奶巧克力中脂肪*的回收率 ASE vs Mojonnier 方法（n=3） | ||
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ASE |
Mojonnier |
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平均值 |
31.80 |
32.34 |
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偏差 |
0.32 |
0.33 |
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相对标准偏差 |
1.02 |
1.02 |
在表3中比较了ASE和Mojonnier萃取可可粉中的脂肪；数据再一次说明两种方法的回收率相当。Mojonnier萃取费时3.5小时，溶剂消耗140mL。可可粉萃取液定容后需离心，以得清彻的溶液。ASE方法耗时18min，溶剂消耗20 mL。
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表3 可可粉中脂肪*的回收率 ASE vs Mojonnier 方法（n=3） | ||
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ASE |
Mojonnier |
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平均值 |
11.82 |
11.52 |
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偏差 |
0.12 |
0.15 |
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相对标准偏差 |
1.01 |
1.33 |
结论
ASE是高效萃取巧克力中脂肪的方法，所得的结果与传统萃取方法相当。然而ASE明显减少时间和溶剂消耗，仅需20mL的溶剂，耗时18min。