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实验采用HPLC法分别对汉中地区城固、南郑、略阳、汉台区、镇巴、宁强、留坝、西乡、佛坪所产牛蒡子中牛蒡苷的含量进行了测定，对汉中产区牛蒡子的品质进行评估。为道地中药材研究和开发、利用汉中地区牛蒡子药材生物资源提供依据。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器Agilent 1100高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)；色谱柱为Hypersil ODS反向柱(4．6 mm×100 mm,5μm)： SK一120E超声波提取仪(宁波科生仪器有限公司)；TTL一10A超纯水机(北京同泰联科技发展公司)；302型电热恒温鼓风干燥箱(上海医疗器械厂)，FA2004电子天平(上海精密仪器有限公司)，于燥器等。
1．2 试剂甲醇(色谱纯)；乙腈(色谱纯)；甲醇(分析纯)；超纯水；对照品牛蒡苷(110819—200404)购于中国药品生物制品检定所。
1．3 供试样品供试牛蒡子由陕西省汉中市药品检验所提供，采集于汉中地区各县，并经陕西理工学院生科院植物学教授杨培君先生鉴定。
2 方法与结果
2．1 色谱条件色谱柱为Hypefil—C18(4．6 mm×100 mm，5μm)；流动相：甲醇-0．2％磷酸溶液一乙腈(20：65：15)；流速：1．O ml／min；检测波长280 nm；柱温25℃；检测进样量为10μl；检测时间为10 min；灵敏度0．02AUFS。
2．2 标准曲线的制作精密称定干燥至恒重的牛蒡苷对照品5．5 mg置于10．O ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，使对照品母液浓度为550．0 mg·L-1。分别精密吸取牛蒡苷对照品母液0．5，1．0，2．0，3．0，5．0 ml用甲醇定容于10．0 ml容量瓶，得到27．5，55．0，110．O，165．0，275 mg·L-1的一组牛蒡苷标准对照溶液。精密吸取上述标准对照溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，测定牛蒡苷得色谱峰面积(结果见图1)，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程为y=5．619 11X+3．28934，r=O．999 25。牛蒡苷在0．08～2．75μg线性关系良好。
2．3 样品的测定将牛蒡子干燥并粉碎，过40目筛，精密称定粉末O．1g，置于50ml具塞三角瓶中，加甲醇30ml，在超声波发生器内提取约30min，取出放冷，滤至50ml容量瓶中，残渣经甲醇洗涤，并人容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。经微孔滤膜(0．45μm)过滤，精密吸取供试样品液101μl，注入高效液相色谱仪中，测定牛蒡苷色谱峰面积，用外标法计算样品中牛蒡苷的含量。结果见表l，图2。
表1汉中地区9县(区)所产牛蒡子的牛蒡苷含量 ％
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地区 平均含量 RSD 地区 平均含量 RSD |
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城固 8．56 1．2 镇巴 8．30 1．1 南郑 8．04 1．5 宁强 8．10 0．68 略阳 6．72 1．8 留坝 7．45 0．78 汉台区 5．60 1．0 西乡 7．65 0．87 佛坪 7．74 O．56 |
n=5
2．4 加样回收率实验精确称定已知牛蒡苷含量的样品，分别加入牛蒡苷对照品，按2．3项下方法处理，检测。计算回收率。平均回收率为100．13％，RSD=0．75％(n=5)。结果见表2。
表2回收率实验
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样品 样品含量 添加量 测得量 回收率 平均回收率 RSD 名称 C／mg·L-1 C／mg·L-1 C／mg·L-1 (％) (％) (％) |
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226.O 100.0 22.6 99.64 牛蒡苷 171.2 55.0 226.2 100.O 100.13 0.75 225.9 99.5 227.0 101.4 |
n=5
2．5 精密度实验在上述色谱条件下，对同一浓度的对照品溶液连续进样测定7次，得峰面积为252．6，RSD=1．15％(n=7)。
2．6 重现性实验按样品测定方法，对城固县产牛蒡子进行5次平行实验，牛蒡苷的平均含量为8．56％，RSD=1．55％(n=5)。
2．7 稳定性实验在室温条件下，精密吸取同一样品溶液，按色谱条件在0，2，4，6，8，10，12 h时间间隔内分别测定牛蒡苷的峰面积，RSD=1．12％，说明牛蒡苷在12 h内稳定。
3 讨论
牛蒡苷作为牛蒡子的主要有效成分及控制指标，由于产地不同，其牛蒡苷含量不尽相同。程新萍报道的15批牛蒡子中牛蒡苷平均含量为8．4％(1998)，张涛报道的牛蒡子中牛蒡苷含量为9．96％(2004)。汉中地区的牛蒡子中牛蒡苷含量以上述报道基本相似。《中国药典》2000版(I部)规定牛蒡子中牛蒡苷含量不低于5．0％，此9个产地产牛蒡子中牛蒡苷含量均达到药典要求，其中城固、镇巴、宁强、南郑牛蒡子中牛蒡苷含量较高，品质较好。