超高效液相色谱——电喷雾串联质谱法同时测定坚果中18种氨基甲酸酯类农药残留

　　1  引言

　　氨基甲酸酯类农药是一类新型杀虫剂，因其高效、低毒、低残留的特点而被广泛应用，与此同时产生的水环境污染、农药残留超标问题已引起广泛关注。由于该类化合物极性强，热稳定性较差，有些物质在气相色谱分析的温度下发生分解，用GC或GCMS并不理想；HPLC紫外、HPLC荧光检测尚无法满足实际样品分析的需要。液相色谱串联质谱法的检出限低、选择性强，是一种高效、高灵敏的检测方法。目前，坚果中氨基甲酸酯类农药残留量的检测国内外未见报道。本实验结合固相萃取样品处理技术，建立了快速测定坚果中18种氨基甲酸酯类农药的SPEUPLCMSMS法。本方法较传统的HPLC方法具有更快的分析速度、更高的分离能力和灵敏度，可以满足坚果中氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测要求。

　　2  实验部分

　　2.1  仪器与试剂  ACQUITY Ultra Performance LCTM超高效液相色谱仪，Quattro Premier 串联四极杆质谱仪（美国Waters公司）；Ultra turrax IKA T18均质器（德国IKA公司）；Heidolph Laborata 4003 control旋转蒸发仪（德国Heidolph公司）；ReactiThermTM Heating Module氮吹仪(美国Pierce公司)；超纯水制备仪(美国Millipore公司)。NH2固相萃取柱（500 mg，3 CC，美国Waters公司）；乙腈、甲醇、二氯甲烷为色谱纯；醋酸铵、无水Na2SO4为分析纯，实验用水均为超纯水。农药标准品（涕灭威亚砜、杀线威、涕灭氧威、灭多威、3OH克百威、涕灭威、残杀威、克百威、甲奈威、抗蚜威、乙硫苯威、异丙威、灭虫威、仲丁威、苯硫威、丙硫克百威、呋线威及丁硫克百威）购于美国Dikma公司。

　　2.2  提取  准确称取粉碎后的干燥样品1.0 g于50 mL离心管中，加入20 mL乙腈，混匀，高速均质提取1 min，离心，将提取液在装有适量无水Na2SO4的漏斗中过滤，滤液于40 ℃水浴中旋转浓缩至近干。

　　2.3  净化  用4 mL二氯甲烷淋洗以活化氨基柱，用2 mL的二氯甲烷甲醇（99∶1, V/V）溶解旋蒸瓶中的残渣，溶解后将溶解液倾入活化的氨基柱中，然后分别用2 mL的二氯甲烷甲醇（99∶1, V/V）清洗旋蒸瓶两次，再倾入氨基柱，收集3次的洗脱液，使用氮吹仪吹干；再用500 μL乙腈溶解，用10 mmol/L醋酸铵溶液定容到5 mL。用0.22 μm的滤膜过滤，待测。

　　2.4  色谱质谱条件  HSS T3色谱柱（50 mm×2.1 mm）；电离方式：电喷雾电离（ESI+）；锥孔气流：氮气，流速：20 L/h；脱溶剂温度：350 ℃；脱溶剂气流：氮气，流速：500 L/h；源温度：110 ℃；毛细管电压：3.0 kV；扫描方式：正离子扫描；检测方式：选择离子监测方式；流速：0.3 mL/min；进样量：10 μL。流动相：乙腈和10 mmol/L醋酸氨；梯度洗脱。

　　3  结果与讨论

　　3.1  液相分离条件的优化  实验对18种氨基甲酸酯类农药的混合标准溶液进行优化分析后，确定了起始的流动相比例和梯度条件。由于电喷雾质谱的电离是在溶液状态电离，因此流动相的组成不但影响目标化合物的保留时间和峰形，还会影响到目标化合物的离子化效率，从而影响灵敏度。选择10 mmol/L醋酸铵溶液和甲醇、10 mmol/L醋酸铵溶液和乙腈为流动相进行实验。结果表明，以10 mmol/L醋酸铵和乙腈为流动相时目标化合物的峰形较好。

　　3.2  质谱条件的优化  采用手动进样，对各种氨基甲酸酯类农药的质谱条件进行优化，在正离子模式下进行了全扫描，以选择适当的分子离子峰。此外，对不同目标化合物的碰撞能量进行优化，得到各物质的特征离子和碰撞能量。在优化条件下，得到18种农药的标准溶液色谱图。

　　3.3  标准曲线  移取适量混合标准溶液，用10 mmol/L醋酸铵溶液乙腈（9∶1, V/V）稀释成2、4、6、8和10 μg/L的溶液,以目标组分的峰面积对相应的质量浓度绘制标准曲线，18种氨基甲酸酯类农药的标准曲线线性关系良好, r＞0.99。

　　3.4  方法的准确度和精密度  选用栗子、松籽2种坚果样品，添加水平为0.02 mg/kg，重复测定5次，计算其回收率和精密度。加标回收率为70.16%～89.23%；RSD%在1.75%～4.65%之间。检出限为0.001～0.148 μg/kg；定量限为0.004～0.495 μg/kg，方法的准确度和精密度均符合残留分析的要求。按本法检测当地超市销售的栗子和松籽样品各5份，结果均未检出氨基甲酸酯类农药残留。