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来源：色谱团购网
摘要目的：探讨中药色谱指纹图谱的制作方法及其在中药质量控制中的研究现状。方法：通过查阅文献，综述了色谱指纹图谱在中药质量控制中碑研究与应用。结果：反相高效液相色谱是目前检测制作中药指纹图谱的首选方法，高效毛细管电泳在中药指纹图谱的研究中有着广阔的应用前景。结论：色谱指纹图谱数据库的建立与成分含量测定同指纹图谱技术相结合是实现中药质量控制的有效手段。
关键词：色谱指纹图谱；质量控制；中药
中药质量控制技术经历了由单一成分的含量测定控制到符合中医临床传统用药习惯的多成分控制的过程。在目前中药成分并不完全明确的前提下，欲建立中药中所有成分的含量测定方法既不现实，也没有必要。建立能够反映中药整体成分，并在一定程度上能够对其成分进行量化的图谱也可实现中药的质量控制。
1、概述
采用色谱或光谱方法对中药材或中成药中共有的、具有特征性的某类或某几类成分进行标示的图谱即是中药的特征指纹图谱。以中药指纹图谱控制中药质量的思路始于2O世纪8O年代，光谱、色谱、电泳等分离、分析手段均可用于制作中药的指纹图谱。聂晶等综述了中药薄层色谱、高效液相色谱(HPLC)、气相色谱、高效毛细管电泳、紫外光谱、红外光谱、核磁共振、质谱、X-射线衍射和DNA指纹图谱方面的研究现状。2000年，国家药品监督管理局出台了一系列中药材和中药注射剂指纹图谱的技术要求。毛细管电泳和狭义的色谱有许多相似点，故放在一起讨论。
2、色谱指纹图谱的建立方法
原料药、生产工艺的规范化是研究色谱指纹图谱的前提，样本的代表性、色谱条件的优化性是其专属、可靠、稳定的基本保障。谢培山等讨论了色谱指纹图谱的研究方法。指纹图谱的研究从技术角度可分为图谱的获得和特征指纹图谱的制作两个阶段。成功的指纹图谱的获得，制样方法至关重要。根据样品所含主要化学成分类型单一与否，可制成一份样品或几份样品进行分析，而后针对样品的性质选择分析方法，摸索分析条件。如挥发油样品可选用气相色谱，鉴于毛细管气相色谱具有柱效高、分离效果好等优点而被应用广泛；非挥发性样品一般可采用HPLC和高效毛细管电泳制作指纹图谱，其中又以毛细管电泳(柱效高)为佳。分析条件的确定以出峰数目多且分布均匀、多数成分可获得基线分离为指导原则。选定分析条件后，还须进行精密度、重现性、稳定性等方法学方面的考察，以确保指纹图谱的准确性。即使通过实验获得了大量的某中药样品的色谱指纹图谱，也并非任意抽取一份都可作为该药的特征指纹色谱，可从中筛选出有共性的信息作为标示中药材或中成药中某一类或某几类成分存在的特征性图谱信息，并据其相对含量的高低，来评价控制中药的质量。
3、应用
薄层色谱指纹图谱由于操作简便而应用广泛，但由于蕴涵信息量较少，在中药指纹图谱的研究中应用较少，但采用薄层扫描，也可获得分离的组分量的信息。林明美等对柴胡1O个品种近4O个样品进行了薄层指纹分析，发现皂苷d，a，c为柴胡属植物的特征成分；凡外形来源区别显著的药材，指纹图谱差异也显著。苏薇薇对不同产地的黄芩样品进行了聚酰胺薄膜分析，提取出能反映样品间差异的数量化特征，并用聚类分析的方法对黄芩进行了鉴别。颜玉贞对黄连中生物碱进行了薄层分离，获得了黄连的薄层色谱指纹图谱。
HPLC尤其是反相HPLC技术成熟，在中药成分分离、分析中获得了广泛的应用，被认为是目前检测中药指纹图谱的首选方法。洪筱坤等对3种正品大黄进行了HPLC分析，建立了能够反映大黄化学组成及其含量分布的HPLC相对保留值指纹图谱，可作为鉴别大黄的依据。乔延江等用对称的三层BP人工神经网络处理中药化学模式识别数据，既达到了提取特征和降维映射的目的，又减少了每引人一个样本需重新计算各样本空间距离和分布的麻烦。提取的特征及相应误差用三维图形表示，可直接用于中药的化学模式识别。乔延江等还对不同种类、不同产地的62个蟾酥样品的HPLC测定结果进行了人工神经网络化学模式识别研究，结果表明该模式识别对中药质量的评价准确、可靠。张亮等采用反相HPLC法对六味地黄丸缺味药模拟方的浸出物进行分析，选取9个色谱峰的峰面积与内标峰面积的比值作为样本特征变量，通过169个训练集样本建立了其中3种缺味药的Bayes法和PRIMA法判别分析数学模型；3种缺味药4种模式的平均正确识别率两法均为100％，对169个预示集样本的平均预示率Bayes法为100％，PRIMA法为99.6％。可见Bayes法和PRIMA法能对六味地黄丸3种缺味药进行准确识别。以鬼臼所含毒性成分为分析对象，利用HPLC建立了一个快速鉴别鬼臼、龙胆、威灵仙的指纹图谱分析方法，结果表明鬼臼指纹图谱与威灵仙、龙胆截然不同，该法不仅可鉴别鬼臼与威灵仙、龙胆，而且可用于不同来源的鬼臼的鉴别。戴德舜等利用HPLC／MS对桂枝汤A部分的双向调节样品与单向升温样品进行了指纹图谱的确定，并比较了二者的差异，对桂枝汤A部分产生双向调节作用的物质基础进行了初步探讨。
气相色谱适用于挥发性组分的分离检测，在中药指纹图谱的研究中进行得较早。张亮曾采用气相色谱-质谱法和模式识别技术对雷公藤和昆明山海棠进行了分类学鉴定。叶崇义等采用程序升温毛细管气相色谱法分析挥发油成分，建立了术类药材气相色谱保留指数(GCRI)指纹谱，并根据色谱峰的重叠率和含量特征图分析对比，以此对术类药用植物种缘关系进行探讨，试图为生药品种鉴定、内在质量评价及药用植物分类学研究开辟一条新途径。潘唏陵等应用模糊聚类分析法，选取不同的模糊相似系数计算公式，对一组术类药材的色谱指数一组分百分比浓度数据进行分析，得到了不同的动态聚类图，由此确定出计算相似系数的标准公式及阈值，并应用此公式及阚值讨论了另两种术类药材的种源归属，为模糊聚类分析法应用于一般药材的分类提供了一种较为切实可行的方法。苏薇薇等u获得了乌鸡白凤丸气相色谱指纹特征。冯毅凡等华佗再造丸及其主要药味红花、川芎、当归、天南星、冰片、吴茱萸的石油醚提取液进行了气相色谱分析，获取了其气相色谱指纹特征，以此作为华佗再造丸及其原料药真伪鉴别的依据，并在此基础上采用特征指标均值偏移度法对华佗再造丸的质量进行了评价。苏薇薇以26个细辛样品为训练集，以19个细辛样品为试验集，采用化学模式识别技术对3种细辛(北细辛、汉城细辛、华细辛)进行了鉴别，从细辛挥发油GC—MS中获得数量化分类特征，并经过PRIMA法处理，实现了计算机对所有样品的鉴别分类，所得结果与实际相符。吴忠对仲景胃灵片及其原料药小茴香、高良姜、肉桂、砂仁的石油醚提取液进行了气相色谱分析，获得了其指纹图谱特征，并以此作为仲景胃灵片及其原料药真伪鉴别的依据。
王天松从检测中草药指纹图谱的角度比较了毛细管电泳与HPLC的优缺点，认为二者虽然不可能相互替代，但毛细管电泳由于柱效高、分离模式广而更适合检测中草药指纹图谱。张朝晖等首次对l2种海马、海龙类药材采用高效毛细管电泳进行鉴别研究，结果表明：种间区别较明显，且该方法速度快、分辨力强、重现性好，为海龙、海马类药材的鉴别提供了一定的参考依据。朱丽玢等用高效毛细管电泳分析了云芝糖肽的水提物，并建立了特征谱，从而为云芝糖肽产品的鉴定及质量标准的建立提供了理论基础。
4、展望
若将药材或制剂的特征指纹图谱转化为在特定条件下的特征数据组，再按照药材——质量标准——特征图谱制作条件——特征图谱数据组逐级划分目录的方式存人数据库，而后将待测样品在相同条件下的特征数据组输入计算机进行检索并进行相关检验，就可提供一个对中药进行快速准确鉴定及质量评价的客观标准。采用多种分析仪器联用(HPLC或毛细管电泳／二级管阵列检测器／质谱／质谱联用)获得的多维指纹图谱，如果能和药物疗效相结合，则既能反映化学信息，又能反映药效信息，进而阐明化学成分和疗效的相关性，从而建立一个高水平的质量标准。同样，指纹图谱技术还能够反映中药所含化学成分量的信息，通过某一成分的精确定量，可借助它对指纹图谱中其他成分的含量进行准确控制，因此单一成分的含量测定和指纹图谱技术相结合是实现中药质量控制的有效手段。