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来源：中国色谱技术网
摘要：本文根据中草药有效成分含量低、超临界稀溶液特点及溶剂提取技术原理，以银杏叶粗提物为原料，通过单因素实验的方法，探讨液固比、浸提温度、浸提时间、提取次数对超临界CO2萃取结晶银杏萜内酯前处理工艺的影响。实验结果表明：在45℃水浴条件下，以20倍银杏叶粗提物体积的混合溶剂(40％丙酮一6O％石油醚)，浸提2次，每次4h，银杏萜内酯前处理效果较佳，萜内酯浸出率在95％以上，浸出物内酯含量在16％以上。采用高效液相色谱法测定银杏内酯含量准确，重现性好。
关键词：超临界CO2：银杏内酯：萃取结晶:浸提
我国自古以来就有以银杏(ginkgobilobaL．)为药的记载。银杏中主要存在两类活性物质：萜内酯类化合物(ginkgolidesandbilobalide)和黄酮苷类化合物(flavonoidglycosides)。银杏叶中所含萜内酯主要是银杏内酯(Ginkgolide)A、B、C(简写GA、GB、GC)和白果内酯(Bilobalide，简写BB)。银杏内酯是一种血小板活化因子(PAF)的特效拮抗剂，而PAF是引起哮喘等许多疾病的重要因素，运用高纯银杏内酯可研制出治疗心脑血管病、哮喘等疾病的银杏类新药。
自60年代起，德、日、法等国家对银杏叶的提取工艺、化学成分进行了大量的研究工作。从近十几年的CA报道来看，欧、美、日等国的研究渐趋单一总提取物的提纯，如总内酯，总黄酮苷的精制纯化。为了提高萜内酯分离效率和产品纯度，作者拟采用超临界流体萃取结晶技术，对含量较高的银杏内酯进行高效分离纯化研究。由于银杏叶粗提物(GBE)中银杏内酯含量较低，直接采用超临界技术将形成超临界稀溶液，严重影响超临界流体萃取结晶技术的分离纯化质量和效率。本文报道超临界CO2萃取结晶银杏萜内酯的前处理技术，进一步完善超临界萃取结晶技术的生产工艺。
1、实验部分
1．1主要材料
银杏叶粗提物(GBE)购于江苏邳州，经HPLC分析银杏内酯含量为6.02％：银杏内酯单体标准品GA、GB、GC：购于中国药品生物制品检定所。
1-2主要设备、仪器
高效液相色谱仪：Waters公司515型HPLC；示差折光检测器：国产旋转蒸发仪。
1-3萜内酯含量的测定
HPLC色谱分析条件
色谱柱为SYMMETRY-C18柱3.9mm×150mm(Waters)，柱温30℃，流动相为甲醇-水(40—60，V／V)，流速lml／min。
标准曲线的制备
定量准确称取对照品GA、GB、GC各2mg，分别置于l0ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得到三种对照品溶液(浓度为0.2mg／m1)。将浓度为0.2mg／ml的混合标准溶液以l、2、5、10、15、20μ1按所选择的色谱条件进样，进样量范围为0.2～4μg，测定进样量与峰面积之间的关系，得到GA、GB、GC、GJ、BB的线形方程及相关系数。
样品溶液的制备与测定精确取样品2～4ml于25ml小烧杯，真空干燥，用流动相溶解，置于10ml容量瓶，并定容至10ml，进量5μl，以外标法计算内酯含量。
选择上述实验结果作工艺设计参数，为建立超临界流体萃取结晶技术开发高纯度银杏萜内酯中试生产线奠定基础。