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【摘要】 目的 建立芩菊清解胶囊的质量控制标准。方法 采用薄层色谱法鉴别制剂中黄芩、野菊花；采用高效液相色谱法测定制剂中黄芩苷的含量。结果 黄芩、野菊花薄层图谱斑点清晰,空白无干扰；黄芩苷在0.066 3～0.530 4 μg范围内呈线性关系,回归方程为：Y＝3×100.7X＋17 488(R2＝0.999 8),平均回收率为98.39%,RSD＝0.90%。结论 该法操作简便、结果准确、重复性好,适用于芩菊清解胶囊的质量控制。
【关键词】 芩菊清解胶囊；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准；黄芩苷
Study on Quality Standard for Qinju Qingjie Capsules
FANG Yu-ting, DONG Jie, GUO Li-wei
Institute of Chinese Medicine, Nanjing University of TCM, Nanjing 210029, China
Abstract：Objective To establish the quality standard of Qinju Qingjie capsules. Methods Radix Scutellariae and Flos Chrysanthemi Indici were identified by TLC. The content of baicalin was determined by HPLC. Results The spots on TLC plates were clear without interference in the blank reference. The standard curve of baicalin was Y＝3×100.7X＋17 488 (R2＝0.999 8), linear range was 0.066 3～0.530 4 μg, average recovery rate of baicalin was 98.39%, RSD was 0.90%. Conclusion The method is simple, accurate, reproducible and can be used for the quality control of Qinju Qingjie capsules.
Key words：Qinju Qingjie capsules；TLC；HPLC；quality standard；baicalin
芩菊清解胶囊系由本校名老中医经验方研制的中药六类新药,由黄芩、野菊花、甘草等5味药材组方而成,具有清热解毒的功效,临床用于上呼吸道感染引起的发热、咽痛等疗效显著。本试验对其质量标准有关内容进行研究。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(Waters510泵,WaterU6K进样器, Waters486紫外检测器,JS-3030江申通用汉化色谱工作站)；ShimazhuLibrorAEL-40SM(十万分之一)电子天平(日本岛津),聚酰胺薄膜。所用药材均购自南京市药材公司,经鉴定,符合2005年版《中华人民共和国药典》(一部)的规定,芩菊清解胶囊由本院自制；黄芩苷对照品(供含量测定用,批号110715- 200212)以及黄芩、野菊花对照药材购自中国药品生物制品检测所。甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司)；重蒸馏水(自制)；其余试剂均为分析纯。
2 定性鉴别
2.1 黄芩
取本品内容物3 g,加乙醚30 mL,超声处理15 min,滤过,弃去乙醚液,滤渣挥尽乙醚,加甲醇30 mL,超声处理15 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水20 mL,加热使溶解,滴加盐酸调pH值至2～3,加乙酸乙酯振摇提取2次(20、20 mL),分取乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1.5 mL使溶解,作为供试品溶液。称取黄芩对照药材0.25 g,同法制成对照药材溶液。再按标准处方比例和制备方法制备缺黄芩的阴性对照溶液。照2005年版《中华人民共和国药典》附录ⅥB试验[1],吸取供试品溶液2 μL,阴性对照溶液2 μL,对照药材溶液1 μL,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(26︰7︰1.5︰3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铁乙醇液,在日光下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性对照无干扰。
2.2 野菊花
取本品内容物3 g,加无水乙醇50 mL,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加10 mL水溶解,过聚酰胺柱(聚酰胺4 g,直径1.5 cm,湿法装柱),用50 mL水洗脱,弃去水液,用甲醇30 mL分次洗脱,收集洗脱液,置水浴上蒸干,残渣加1 mL甲醇溶解,即得供试品溶液。称取野菊花对照药材0.25 g,加甲醇15 mL,超声30 min,放冷,滤过,滤液蒸干,用1 mL甲醇溶解即得对照药材溶液。再按标准处方比例和制备方法制备缺野菊花的阴性对照溶液[2]。照2005年版《中华人民共和国药典》附录ⅥB试验,吸取阴性对照溶液2 μL、供试品溶液2 μL、对照药材溶液1 μL,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸乙酯-丁酮-二氯甲烷-甲酸-水(15︰15︰6︰4︰1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铝乙醇液,用电吹风热风吹干,置紫外光灯下(365 nm)观察。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰。
3 黄芩苷的含量测定
3.1 色谱条件[1]
色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水-磷酸(47︰53︰0.2)；检测波长：280 nm；流速：1.0 mL/min；柱温30 ℃。理论塔板数按黄芩苷计不低于2 500,进样量：5 μL。
3.2 对照品溶液的制备
精密称取在60 ℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品6.6 mg,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,配成0.132 6 mg/mL的黄芩苷对照品溶液。
3.3 供试品溶液的制备
取本品内容物0.6 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%乙醇50 mL,称重,超声处理30 min,放冷,称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液5 mL置10 mL容量瓶中,用70%乙醇定容至刻度,摇匀,即得。
3.4 空白试验
原方除去黄芩药材,按制剂工艺方法进行制备,得缺黄芩的阴性制剂。取阴性制剂0.60 g,按供试液的制备方法制备阴性供试液,依法分析,阴性制剂色谱图在黄芩苷相应保留时间位置无干扰峰(见图1)。
3.5 线性关系考察
分别精密吸取黄芩苷对照品溶液(0.132 6 mg/mL)1、2、4、6、8 mL置10 mL的量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,分别精取5 μL注入液相色谱仪,记录色谱图,以黄芩苷对照品浓度为横坐标、峰面积值为纵坐标绘制标准曲线。得回归方程：Y＝3×100.7X＋17 488(R2＝0.999 8),表明黄芩苷在0.066 3～0.530 4 μg范围内呈良好线性关系。
3.6 精密度试验
精密吸取“3.5”项下对照品溶液5 μL,重复进样6次,结果黄芩苷峰面积积分值的RSD＝0.9%,表明本方法精密度良好。
3.7 稳定性试验
取同一批供试品溶液(批号070801),分别于0、2、4、6、8、10、12 h时测定,记录色谱图。结果RSD＝0.7%,表明供试品溶液在12 h内基本稳定。
3.8 重复性试验
取同一批供试品6份(批号070801),分别精密称定,按上述供试品溶液制备方法制备溶液并测定。结果RSD＝0.9%,表明方法重现性良好。
3.9 加样回收率试验
取同一批已知含量为14.16 mg/mL的供试品6份,每份约0.3 g,再分别精密加入黄芩苷对照品溶液(0.428 mg/mL)10 mL,依法测定,计算黄芩苷的回收率,结果平均回收率为98.39%, RSD＝0.9%。见表1。表1 加样回收率试验结果（略）
3.10 样品测定
取芩菊清解胶囊样品3批,每批平行取样2份,按照拟定方法制备对照品溶液和供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各5 μL,注入液相色谱仪,依法测定,用外标一点法计算黄芩苷的含量。结果见表2。 表2 黄芩苷含量测定结果(略)
4 讨论
本试验采用薄层色谱法鉴别芩菊清解胶囊中黄芩、野菊花,色谱斑点清晰,附近无杂质斑点干扰,专属性强,简便迅速,方法重现性好,准确可靠。
在对黄芩的鉴别过程中,曾参照《中华人民共和国药典》黄芩药材鉴别项下的方法和色谱条件进行鉴别,结果各斑点分离效果不理想；我们对样品的处理方法以及薄层色谱的固定相、展开剂等进行了摸索。供试品溶液曾采用正丁醇萃取,固定相曾采用硅胶G板、硅胶H板、聚酰胺薄膜板,展开剂曾试用36%醋酸、正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5︰3︰1︰1)等,但在上述条件下色谱斑点或拖尾或不清晰,经过反复比较最终选用本试验的条件。
黄芩是该复方中的君药,因此选用黄芩苷含量作为测定指标。有关黄芩苷含量测定方法文献报道有多种,如比色法、薄层光密度法、薄层扫描法、高效液相色谱法等,本试验采用高效液相色谱法,具有重复性、准确性好的特点,可以作为芩菊清解胶囊的质量控制方法。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.387－388,211－212.
[2] 吴小辉.感冒灵颗粒质量标准的研究[J].广东药学院学报,2003,19(3)：208－210.