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【摘要】 目的 完善泻痢消丸的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别处方中的黄连、白芍、吴茱萸、茯苓；采用高效液相色谱法测定泻痢消丸中盐酸小檗碱的含量。结果 定性定量方法简便、准确、专属性强、重现性好。结论 改进后的质量标准可有效控制本制剂的内在质量。
【关键词】 泻痢消丸；薄层色谱法；高效液相色谱法；盐酸小檗碱
Study on Quality Standard for Xielixiao Pills
ZHOU Zhao-yue, MA Chen-guang, JIN Xiang-qun
1.Pharmaceutical College of Jilin University, Changchun 130021, China；2.Chemical and Pharmaceutical College of Jiamusi University, Jiamusi 154007, China
Abstract：Objective To improve the quality standard for Xielixiao Pills. Methods Rhizoma coptidis, Radix paeoniae alba, Fructus evodia, Poria were identified by TLC. The content of Berberine Hydrochloride was determined by HTLC. Results The identification and content determination methods were simple, accurate, exclusive, and with good reproducibility. Conclusion The improving quality standard can control the quality of this product effectively.
Key words： Xielixiao Pills；TLC；HPLC；Berberine Hydrochloride
泻痢消丸是由黄连、甘草、吴茱萸、茯苓、苍术、泽泻、白芍等中药经加工制成的复方制剂,具有清热燥湿、行气止痛、化浊止痢之功效。用于急性肠炎、结肠炎、痢疾等症的治疗。为控制其内在质量,我们对黄连、白芍、吴茱萸、茯苓进行了定性鉴别,并采用高效液相色谱法对盐酸小檗碱进行了含量测定及相应的方法学考察。
1 仪器与试药
岛津-高效液相色谱仪(LC-10ATVP)。实验样品(吉林大学药学院药剂室)。盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号110713-200208),芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号0736-200014)。吴茱萸、茯苓药材(长春市药材公司)。层析用硅胶G(青岛海洋化工厂)。乙腈为色谱纯(天津市四友生物医学技术有限公司)；水为二蒸水；其他试剂均为分析纯。
2 定性鉴别
2.1 黄连的薄层色谱鉴别[1]
取本品4丸,研细,加甲醇20 mL,加热回流30 min,滤过,滤液浓缩至5 mL,作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.7 g,加甲醇70 mL,加热回流30 min,滤过,滤液浓缩至5 mL,作为对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005版《中国药典》(一部)附录Ⅵ B]试验,吸取上述溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,分别显相同的黄色荧光斑点。
2.2 白芍的薄层色谱鉴别[1]
取本品5丸,研细,置具塞锥形瓶中,加甲醇20 mL,超声提取40 min,滤过,滤液置蒸发皿中蒸干,残渣加100 mL水溶解,过滤,滤液上已经处理好的大孔树脂柱(直径2 cm,长15 cm),用100 mL水洗脱,再用20%乙醇100 mL洗脱,收集20%乙醇洗脱液,洗脱液蒸干,残渣加5 mL甲醇溶解,作为供试品溶液。另取芍药苷对照品,加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005版《中国药典》(一部)附录Ⅵ B]试验,吸取上述溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(20∶2.5∶5∶0.1)为展开剂,展开3次,取出,晾干,喷以5%香草醛,105 ℃加热5 min。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的淡紫色斑点。
2.3 茯苓的薄层色谱鉴别[1]
取本品5丸,研细。加乙醚20 mL,超声处理20 min,滤过,滤液挥去乙醚,残渣加乙醚1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取茯苓对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2005版《中国药典》(一部)附录Ⅵ B]试验,吸取上述溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙醚-石油醚(沸程30～60 ℃)(1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸溶液,热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
2.4 吴茱萸的薄层色谱鉴别[1]
取本品3丸,研细,加乙醇10 mL,静置30 min,超声处理30 min,滤过,滤液作为供试品溶液。另取吴茱萸对照药材0.4 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2005版《中国药典》(一部)附录Ⅵ B]试验,吸取上述溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-醋酸乙酯-甲醇-三乙胺(19∶5∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
3 含量测定[1]
3.1 溶液的制备和测定
3.1.1 对照品溶液的制备
精密称取盐酸小檗碱对照品适量,加甲醇定容至刻度,摇匀,制成每1 mL含0.08 mg的溶液,备用。
3.1.2 供试品溶液的制备
取样品10丸,研细,取约0.3 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-盐酸(100∶1)溶液50 mL,密塞,称定重量,置60 ℃水浴中温浸30 min,超声处理1 h,放冷,再称定重量,用甲醇-盐酸(100∶1)溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液5 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
3.1.3 阴性对照品溶液的制备
按处方比例,取缺黄连的样品约0.3 g,精密称定,按“3.1.2”项下的方法操作,制备阴性对照品溶液。
3.1.4 测定法
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL,注入高效液相色谱仪,测定,即得。
3.1.5 色谱条件及系统适应性实验
用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾(25∶75)为流动相；检测波长为345 nm；柱温：40.0 ℃；流量：1.0 mL/min；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3 000。
3.2 方法学考察及结果
3.2.1 标准曲线的绘制
精密称取盐酸小檗碱对照品适量,加甲醇制成每1 mL含0.08 mg的溶液,精密吸取此溶液各5、7.5、10、12.5、15 μL分别注入液相色谱仪,测定。以进样量为横坐标,以峰面积值为纵坐标作图,得一条近似通过原点的直线,回归方程为：Y=2 531 380X-50 594.92,r=0.999 4。结果表明,盐酸小檗碱进样量在0.4～1.2 μg之间,进样量与峰面积值呈良好的线性关系。
3.2.2 稳定性考察
分别取放置4、8、12、16、20、24 h的供试品溶液,测定泻痢消丸中盐酸小檗碱的含量,以考察其稳定性。RSD值为1.24%,表明供试品溶液至少在24 h内稳定。
3.2.3 精密度考察
吸取同一供试品溶液,重复进样6次,计算相对标准偏差,则盐酸小檗碱的RSD为0.85%,表明仪器精密度良好。
3.2.4 重现性试验
取样品内容物粉末6份,每份3.0 g,精密称定,按“3.1.2”项下“供试品溶液的制备”方法操作。吸取供试液和对照液各10 μL,注入高效液相色谱仪,测定样品中盐酸小檗碱的含量。结果样品中盐酸小檗碱的平均含量为18.34 mg/g,RSD值为0.85%。
3.2.5 回收率的测定
精密称取盐酸小檗碱对照品适量,加入到已知盐酸小檗碱含量的泻痢消丸(批号20041201,丸中盐酸小檗碱含量为18.34 mg/g,详见重现性实验)中,按“含量测定”项下方法操作,制备供试品溶液,测定泻痢消丸中盐酸小檗碱的含量,计算回收率。测定结果见表1。表1 回收率试验结果(略)
3.2.6 盐酸小檗碱含量测定
精密吸取“3.1.1” 项下对照品溶液和“3.1.2”项下供试品溶液各10 μL,注入高效液相色谱仪,进行测定,计算样品中盐酸小檗碱的含量。结果见表2。表2 盐酸小檗碱含量测定结果(略)
3.2.7 阴性干扰试验
取“3.1.3”项下的阴性对照品溶液,按样品中盐酸小檗碱含量测定项下的方法进行测定。结果供试品色谱图中,在与盐酸小檗碱对照品色谱峰相应的位置上,没有色谱峰出现,表明处方中其他药味对其测定无干扰。结果见图1。
4 讨论
白芍的定性鉴别中,曾采用文献报道的超声处理法提取其有效成分芍药苷,发现在薄层板上杂质斑点较多,且主斑点不明显；后经多种方法筛选,发现样品经大孔树脂处理后,杂质斑点明显减少,且主斑点突出。采用本法,重现性好,故列入正文。
高效液相色谱法测定黄连中盐酸小檗碱含量时,曾采用0.1 mol/L的磷酸二氢钾溶液与乙腈的混合溶液,发现磷酸二氢钾溶液的浓度较高时,容易发生阻塞,原因是磷酸二氢钾为缓冲盐溶液,盐类易溶于水,而遇到乙腈等有机溶剂则析出结晶而阻塞,致使压力升高,仪器不能正常运转。经试验发现,磷酸二氢钾溶液浓度低于0.05 mol/L、乙腈的比例不超过30%时,不会发生阻塞现象。后经多次试验,采用本法测定,色谱峰峰形良好,分离度达到要求(>1.5),故列入正文。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005. 118,213－214,68,166,118.