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【摘要】 目的 制定小儿闰土颗粒质量标准。方法 采用薄层色谱法对制剂中的香附、白术、砂仁、陈皮进行鉴别;采用高效液相色谱法测定白芍中芍药苷的含量。结果 用薄层色谱法能较好地鉴别出制剂中的香附、白术、砂仁、陈皮;芍药苷在1.176～11.760 ?g范围内线性关系良好,r=0.999 99,平均回收率为99.42%,RSD=2.26%。结论 本法简便、准确、重复性好,可用于本制剂的质量控制。
【关键词】 小儿闰土颗粒;薄层色谱法;高效液相色谱法;芍药苷;质量标准
Study on Quality Standard of Xiaoer Runtu Granule QI Hong1, LI Qi-yan2 (1.Jinan Institute for Drug Control, Jinan 250001, China;2.Shandong Institute for Drug Control, Jinan 250101, China)
Abstract：Objective To establish the quality standard of Xiaoer Runtu granule. Methods Xiangfu, Baizhu, Sharen and Chenpi were identified by TLC. The content of paeoniflorin was determined by HPLC. Results TLC could identify Xiangfu, Baizhu, Sharen and Chenpi. The peoniflorin showed good linear correlation at the range of 1.176～11.760 ?g, r=0.999 99, the average recovery of paeoniflorin was 99.42%, RSD=2.26%. Conclusion The method is simple and can be used to control the quality of Xiaoer Runtu granule with high accuracy and good reproducibility.
Key words：Xiaoer Runtu granule;TLC;HPLC;paeoniflorin;quality standard
小儿闰土颗粒由白芍、香附、白术、陈皮、砂仁等组成,具有行气止痛、养胃健脾的作用,用于治疗气瘀、气滞所致胃脘疼痛、食积、消化不良等病症。为更好地控制本制剂的质量,笔者对其质量标准进行了研究。
1 仪器与试药
KQ-250E医用超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);751GD紫外分光光度计(上海分析仪器厂);LC-10AT高效液相色谱仪(日本岛津),SPD-10A检测器。
小儿闰土颗粒(山东中医药大学附属医院制剂室)。芍药苷(批号110736-200732,供含量测定用)、α-香附酮(批号110748- 200507)、橙皮苷(批号110721-200512)、乙酸龙脑酯(批号0759-9001)、白术对照药材(批号0925-200005)均购于中国药品生物制品检定所。硅胶G(青岛海洋化工厂);乙腈(色谱纯);其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层鉴别
2.1.1 香附的鉴别 取本品40 g,研细,置1 000 mL圆底烧瓶中,连接挥发油提取器,加水适量,自上端加醋酸乙酯5 mL,加热回流提取1 h,取醋酸乙酯层作为供试品溶液。取阴性对照品按供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。另取α-香附酮对照品,加醋酸乙酯制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液各5 ?L,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以环己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以二硝基苯肼试液,放置片刻。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。
2.1.2 白术的鉴别 取“2.1.1”项下的供试品溶液作为供试品溶液。取阴性对照品按供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。另取白术对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液各5 ?L,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以环己烷-醋酸乙酯(50∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。
2.1.3 砂仁的鉴别 取“2.1.1”项下的供试品溶液作为供试品溶液。取阴性对照品按供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。另取乙酸龙脑脂对照品,加醋酸乙酯溶解制成每1 mL含10 ?L的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取供试品溶液、阴性对照品溶液、对照品溶液各4 ?L,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚(30～60 ℃)-醋酸乙酯(38∶3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰[1]。
2.1.4 陈皮的鉴别 取本品5 g,研细,加甲醇20 mL,超声处理15 min,滤过,滤液浓缩至5 mL,作为供试品溶液。取阴性对照品按供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。另取橙皮苷对照品,加甲醇制成饱和溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取供试品溶液、阴性对照品溶液各3 ?L,对照品溶液5 ?L,分别点于同一用0.5% NaOH制成的硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以AlCl3试液,置紫外光(365 nm)灯下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰[2]。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×30 mm, 5 ?m);流动相：乙腈-水(12.5∶87.5);流速：1.0 mL/min;检测波长：230 nm;进样量：20 ?L[3]。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取于五氧化二磷干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含0.31 mg的溶液,即得。
2.2.3 供试品溶液的制备 取本品5 g,研细,精密称定,加甲醇100 mL,索氏提取4 h,提取液加热挥去甲醇,残渣加甲醇10 mL溶解,作为供试品溶液。
2.2.4 阴性对照溶液的制备 取缺白芍的各味药材,按本制剂的制备工艺,制作空白样品,并按供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。
2.2.5 空白试验 吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20 ?L分别进样测定,色谱图见图1。可见,供试品色谱中具有与芍药苷对照品保留时间一致的色谱峰,而阴性对照没有。说明测定的专属性好、无干扰。
2.2.6 线性关系的考察 精密称取芍药苷对照品5.88 mg,置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,混匀,分别精密吸取上述对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、1.0 mL置1 mL量瓶中。以芍药苷对照品进样量对峰面积作图绘制标准曲线,计算,得回归方程：Y=17 122 826X-16 702.4,r=0.999 99,说明芍药苷对照品在1.176～11.760 ?g范围有较好的线性关系。
2.2.7 精密度试验 分别精密吸取供试品溶液20 ?L,连续进样5次,测定芍药苷的峰面积,结果RSD=2.56%,表明仪器精密度良好。
2.2.8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液,每隔2 h进样1次,共进样6次,测定峰面积,结果RSD=1.71%,表明供试品溶液在12 h内稳定性较好。
2.2.9 重复性试验 取本制剂5份,照供试品溶液的制备方法操作,如法测定,计算芍药苷含量,结果RSD=0.98%,表明方法的重复性良好。
2.2.10 加样回收率试验 取已知芍药苷含量的样品,精密称定,加入一定量的芍药苷对照品,按样品测定方法测定芍药苷含量,计算回收率。由结果可知,测定方法的回收率高,能准确测定出制剂中芍药苷的含量。结果见表1。表1 加样回收率试验结果
2.2.11 样品含量测定 分别取3批小儿闰土颗粒,按上述含量测定方法进行测定,结果芍药苷含量分别为1.88、1.86、1.87 mg/g。
3 讨论
鉴别砂仁时,曾试用2005年版《中华人民共和国药典》(一部)砂仁项下的展开剂环己烷-醋酸乙酯(22∶1),但分离度差,后改用石油醚-醋酸乙酯(38∶3)为展开剂,效果较好。此外,采用低温展开,斑点圆整清晰。
鉴别陈皮时,以2005年版《中华人民共和国药典》(一部)陈皮项下的一次展开系统醋酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)展开,即可具有较好的效果,故未采用其二次展开系统。
芍药苷性质稳定,含量较高,是小儿闰土颗粒中的主要有效成分之一,因此通过测定其含量来进行质量控制。芍药苷能够溶于甲醇,本试验采用甲醇进行提取。由于提取方法不同,提取出的芍药苷含量也不同,因而分别对供试品溶液制备方法中提取方法、提取时间进行考察,结果表明,采用索氏提取4 h效果比较好,故采用本文中供试品溶液的制备方法。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集[M].广州：广东科技出版社,1993.106.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.132.
[3] 王怡君,郭兰建,周文生,等.HPLC法测定中风安丸中芍药苷的含量[J].中草药,1999,30(7)：513.