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【摘要】 目的 建立糖尿乐片的质量标准。方法 采用薄层色谱法对方中天花粉、黄芪、红参、鸡内金进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定糖尿乐片中葛根素的含量。结果 定性鉴别斑点可清晰分离,专属性强；葛根素含量测定的平均加样回收率为98.25%,RSD=0.64%。结论 方法简便、灵敏度高,可用于糖尿乐片的质量控制。
【关键词】 糖尿乐片；薄层色谱法；高效液相色谱法；葛根素
Study on Quality Standard of Tangniaole Tablet
KANG A-long, TANG Ying-shuang, ZHANG Su-heng, et al
1.No.451 Hospital of PLA, Xi’an 710054, China；2.No.323 Hospital of PLA, Xi’an 710054, China
Abstract：Objective To establish a method for the quality standard of Tangniaole Tablet. Methods Radix trichosanthis, Radix astragali, Radix et Rhizoma ginseng rubra and Endothelium corneum gigeriae galli in Tangniaole Tablet were identified by TLC. The cotent of Puerarin was detrmined by HPLC. Results The spots of samples on TLC can be well separated and the method had strong specificity. The averge recovery of emodin was 98.25% and RSD=0.64%. Conclusion The method is simple, sensitve and accurate. It can be used for quality control of Tangniaole Tablet
Key words：Tangniaole Tablet；TLC；HPLC；Puerarin
糖尿乐片是由部颁品种糖尿乐胶囊[1]改变剂型而来,由天花粉、山药、黄芪、红参、地黄、枸杞子、知母、天冬、茯苓、山茱萸、五味子、葛根、鸡内金(炒)等13味药材组成,具有滋阴补肾、益气润肺、和胃生津、调节代谢机能的功能。用于消渴症引起的多食、多饮、多尿、四肢无力等症,可降低血糖、尿糖。原剂型糖尿乐胶囊无薄层鉴别和含量测定项,我们经实验制定了方中天花粉、黄芪、红参、鸡内金4味药材的薄层鉴别方法,并建立了高效液相色谱法测定葛根素含量的方法,方法操作简便,结果准确,可很好地控制本品的质量。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(SPECTRA SYSTEM P4000),紫外检测器(SPECTRA UV100,美国热电)；色谱工作站(SEPU3000,杭州普惠)。
甲醇为色谱纯；其余试剂为分析纯。葛根素对照品(110752-200410,供含量测定用)购自中国药品生物制品检定所。糖尿乐片由陕西功达药业有限公司提供。
2 定性分析[2]
2.1 天花粉
取本品10片,研细,加稀乙醇20 mL,超声处理30 min,滤过,滤液作为供试品溶液。另取天花粉对照药材2 g,同法制成对照药材溶液。再取缺天花粉的阴性样品,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[《中华人民共和国药典》2000年版(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述3种溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-无水乙醇-冰醋酸-水(8∶2∶2∶3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以茚三酮试液,在105 ℃加热约10 min。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照液色谱中无相应的色谱斑点,说明阴性无干扰。
2.2 红参和黄芪
取本品30片,研细,加乙醚50 mL,浸泡1 h,时时振摇,滤过,滤渣加甲醇60 mL,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水20 mL使溶解,置分液漏斗中,用水饱和正丁醇萃取3次,每次20 mL,合并正丁醇液,用氨试液洗涤2次,每次20 mL,弃去,正丁醇液水浴蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取黄芪甲苷及人参皂苷Rb1、Re、Rg1对照品,加甲醇制成每1 mL各含1 mg的混合溶液,作为对照品溶液。再分别取缺红参和黄芪的阴性样品,按供试品溶液的制备方法制成红参阴性对照溶液和黄芪阴性对照溶液。照薄层色谱法[《中华人民共和国药典》2000年版(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述4种溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点；紫外光灯(365 nm)下,显相同颜色的荧光斑点。红参和黄芪阴性对照液色谱中,均无相应的色谱斑点,说明阴性无干扰。
2.3 鸡内金
取鸡内金对照药材0.5 g,研细,加水饱和正丁醇20 mL,超声处理30 min,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加丙酮1 mL使溶解,作为对照药材溶液。另取缺鸡内金的阴性样品,按照“2.2”项下供试品溶液的制备方法,制得阴性对照溶液。照薄层色谱法[《中华人民共和国药典》2000年版(一部)附录ⅥB]试验,吸取“2.2”项下的供试品溶液10 μL,对照药材溶液5 μL,阴性对照溶液10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-丙酮-甲酸(9.5∶0.5∶0.06)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液,热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照液色谱中,无相应的色谱斑点,说明阴性无干扰。
3 定量分析
3.1 色谱条件
Dikma C18柱(5 μm,150 mm×4.6 mm)；流速：1.0 mL/min ；流动相：甲醇-水(25∶75)；检测波长：250 nm；柱温：室温。理论塔板数按葛根素计算应不低于4 000。
3.2 溶液的制备
3.2.1 对照品溶液的制备
取葛根素对照品适量,精密称定,加30%乙醇制成每1 mL含50 μg的溶液,即得。
3.2.2 供试品溶液的制备
取本品重量差异项下的样品,研细,混匀,取1.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入30%乙醇50 mL,密塞,称定重量,超声处理30 min,放冷,再称定重量,用30%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
3.2.3 缺葛根的阴性对照品溶液的制备
按处方比例制备缺葛根的阴性对照样品,按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。
3.3 测定方法
分别精密吸取对照品溶液5 μL,供试品溶液10 μL,注入液相色谱仪,测定。结果表明阴性无干扰。
3.4 线性关系考察
精密吸取浓度为52 μg/mL的对照品溶液2、4、6、8、10 μL进样,以葛根素进样量(μg)为横坐标(X),以葛根素峰面积积分值为纵坐标(Y),绘制标准曲线,并对所测得的数据进行回归分析,回归方程为Y=3 551 848.077X-11 743.4,r=0.999 9。说明葛根素在0.104～0.520 μg范围内有良好的线性关系。
3.5 精密度试验
取供试品溶液,连续进样5次,各10 μL,分别测定葛根素峰面积积分值,并计算峰面积积分值的相对标准偏差,RSD= 0.34%。说明所建立方法的精密度良好。
3.6 稳定性试验
取同一供试品溶液,分别在0、2、4、6、8 h各进样10 μL,分别测定葛根素峰面积积分值,并计算峰面积积分值的相对标准偏差,RSD=0.71%。表明制备的供试品溶液在8 h内稳定。
3.7 重现性试验
取同一批号的样品(20040901)5份,照供试品溶液制备方法制备供试品溶液,分别取10 μL进样,在上述色谱条件下分别测定,计算样品中的含量,结果平均值为0.149 mg/片,RSD= 1.62%。表明方法的重现性良好。
3.8 加样回收率试验
取已知含量的样品(20040901,0.149 mg/片)适量,研细,取1.0 g,精密称定,精密加入葛根素对照品适量,照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,按上述色谱条件及测定方法进行测定,计算回收率,平均回收率为98.25%, RSD=0.64%。结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略）
3.9 样品含量测定
按供试品溶液制备方法对3批样品进行处理,分别制备供试品溶液,分别进样测定葛根素峰面积并计算葛根素含量。结果见表2。表2 样品中葛根素的含量测定结果(略)
4 讨论
定量分析试验中,比较了供试品溶液制备中不同超声时间的提取率,结果超声20、30、40 min的含量分别为0.10、0.13、0.14 mg/片,说明超声处理30 min就基本提取完全,故确定提取时间为30 min。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2000.72.
[2] 中华人民共和国药品标准.中药成方制剂(第十三册)[S].WS3-B-2644-97.