良园枇杷叶膏的质量标准研究

【关键词】 良园枇杷叶膏 枇杷叶 甘草浸膏 薄层色谱法 高效液相色谱法 质量标准

良园枇杷叶膏由枇杷叶、干芦根、桔梗、甘草浸膏、紫菀、盐酸麻黄碱、陈皮、杏仁水组
成，具有清宣肺气，化痰镇咳功效。用于治疗风热感冒、咳嗽、气喘。良园枇杷叶膏的质量标准收载于部颁标准中药成方制剂第十三册［1］，原标准只有橙皮苷的薄层色谱鉴别，未涉及含量测定。刘华红等［2］对原标准中橙皮苷的薄层方法进行了改善。孙雪妹等［3］对盐酸麻黄碱作了检测方法的研究。笔者建立了方中枇杷叶、甘草浸膏的薄层色谱（TLC）鉴别方法及陈皮中橙皮苷含量测定的高效液相色谱（HPLC）法，报道如下。

1  仪器与试药 

   
LC10AT vp型输液泵（日本岛津）；SPD10A vp型检测器（日本岛津）；浙大N2000色谱工作站； TU1221型分光光度计（北京通用仪器）；德国BP211D Sartorius 电子天平（十万分之一）。枇杷叶（批号：121261200502），甘草对照药材（批号：120904200511），橙皮苷对照品（批号：110721200512），均由中国药品生物制品检定所提供；所用试剂乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯；良园枇杷叶膏（上海童涵春堂制药有限公司，批号：060401，060402，060403，061101，070101，070102）。

2  方法与结果 

2.1  TLC法 
枇杷叶：取本品20g，加水20ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的氨试液30ml洗涤，正丁醇液置水浴蒸干，残渣加水3～5ml加热使溶解，放冷，通过已处理好的D101型大孔吸附树脂柱（内径1.0cm，长10cm），用50ml水洗脱，弃去水液，再用50%乙醇40ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取缺枇杷叶的阴性样品，同法制得阴性对照溶液。另取枇杷叶对照药材1g，加水100ml，煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至约30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验[4]，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-乙酸乙酯-冰醋酸（8∶4∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，阴性对照无干扰,见图1。

   
甘草浸膏：取甘草对照药材2g，加水100ml，煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至约30ml，同上述鉴别项下枇杷叶对照药材溶液制备方法，同法制成对照药材溶液。取缺甘草浸膏的阴性样品，按枇杷叶项下的供试品溶液制法制得阴性对照溶液。按薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取对照药材溶液和鉴别枇杷叶项下的供试品溶液各3～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环已烷-乙酸乙酯-冰醋酸（10∶3∶0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，见图1。

图1  薄层色谱图

1～3供试品溶液；S对照品（对照药材）溶液；Y阴性对照溶液

2.2  含量测定 

2.2.1  色谱条件与系统适应性试验 
色谱柱：C18柱（4.6mm×250mm，5μm，依利特）；流动相：乙腈0.4%磷酸溶液（18∶82）；检测波长：284nm；柱温：25℃；流速：1.0ml/min；理论塔板数按橙皮苷峰计算应不低于2 000为宜。

2.2.2  溶液的制备 
精密称取橙皮苷对照品2.05mg置50ml量瓶中，3.00mg置100ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取样品约6.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml称定重量，摇匀，超声处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心。取上清液，作为供试品溶液。取缺陈皮的阴性样品适量，按供试品溶液制备方法制取阴性对照溶液。

2.2.3  方法学考察 
专属性试验：取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按上述色谱条件依法测定，阴性对照溶液色谱图中，在与橙皮苷对照品溶液色谱峰相应位置上无色谱峰出现，而供试品溶液相应位置处则有色谱峰，表明阴性对照无干扰。见图2。

图2  高效液相色谱图

    线性关系考察：精密称取橙皮苷对照品1.60mg置10ml量瓶中加甲醇溶解并定容至刻度摇匀，作为储备液，分别用甲醇稀释成浓度为0.0016mg/ml、0.0032mg/ml、0.04mg/ml、0.08mg/ml、0.16mg/ml的溶液。分别精密吸取对照品溶液20μl，按上述色谱条件测定。以峰面积对对照品量进行线性回归，得回归方程Y=721298.6677X+2164.178675，R=0.9997 （n=5）。结果表明橙皮苷在橙皮苷量为0.032μg～3.2μg范围内，其进样量与峰面积线性关系良好。

   
精密度试验：取同一批次（批号：060401）的供试品溶液，按上述的色谱条件，重复进样5次，每次20μl，结果RSD为1.51%，表明仪器精密度良好。

   
稳定性试验：取同一批次（批号：060401）的供试品溶液于0、3、6、12、24小时内，按上述色谱条件测定，分别进样20μl，结果RSD为1.02%，表明样品在24小时内稳定性良好。

   
重现性试验：取同一批次（批号：060401）的样品，分别制备5份供试品溶液，精密吸取各供试品溶液20μl，按上述色谱条件测定，结果RSD为0.73%，表明重现性良好。

   
加样回收试验：取已知含量为0.349mg/g的（批号：060401）良园枇杷叶膏样品4.0g，6份，分别精密加入橙皮苷对照品适量，制备各供试品溶液，分别进样20μl，按上述色谱条件测定，结果本方法的加样回收率为98.20%，RSD为0.33%，见表1。

2.2.4  样品含量测定 
取5个批号的样品，按照供试品溶液制备方法制备溶液，按上述条件测定，结果批号为060401，060402，060403，070101，070102的样品中橙皮苷含量分别为0.32、0.29、0.30、0.17、0.16mg/g。

表1  橙皮苷加样回收试验结果

序号取样量
/g含橙皮
苷量/mg加入橙皮
苷量/mg测得橙皮
苷量mg回收率/%

13.986591.391 1.22    2.58697.95

23.852571.345 1.72 3.04098.55

34.015761.402 1.13 2.515 98.50

43.392561.184 1.08 2.244 98.15

53.859411.347 1.392.714 98.35

63.702541.292 1.01 2.27997.72

X=98.20%    RSD=0.33%

3  结  论 

   
实验发现060401、060402、060403批的含量结果与070101、070102批所测样品的结果相差较大。原因：前三批号的样品均为小试所得，故成分的转移率较高；而后两批为大生产样品，还受到药材来源、制剂生产等多种因素影响。

【参考文献】
  [1]
中华人民共和国卫生部.卫生部药品标准中药成方制剂(第十三册)[S].1998.96.

[2] 刘华红,林艳.对良园枇杷叶膏质量标准修改的建议[J].浙江中西医结合杂志,2003，13（8）：512.

[3] 孙雪妹,杨明华，戴影秋.良园枇杷叶膏中盐酸麻黄碱的HPLC测定[J].中国医药工业杂志,2006,37(11):768769.

［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京:化学工业出版社,2005.89,附录3335.