HPLC法测定复方氯霉素栓中氯霉素含量

泸州医学院附属医院药剂科　四川　646000

　　复方氯霉素栓(以下简称CG栓)是我院研制的一种以氯霉素等为主药的复方阴道栓剂，对细菌性阴道炎，特别是老年性阴道炎有较好疗效。本文采用高效液相色谱法测定其中主药含量，方法准确、可靠，完全适合CG栓中氯霉素含量的测定。
1　仪器与药品
　　美国PE Neloson高效液相色谱仪，包括250C型泵、1022LC微机控制器、1022LC Plus自动积分仪、235C二级管阵列检测器。
　　氯霉素对照品(纯度：99.9 %，西南合成制药厂提供)；药用氯霉素粉；甲醇为分析纯；水为二次重蒸馏水；CG栓为自制品：氯霉素粉20 g，其它成分(混合脂肪酸甘油酯，吐温—80，甘油等)330 g，制成100粒，粒重3.5 g，氯霉素含量5.71 %；空白栓：同CG栓，仅不含氯霉素。
2　色谱条件
色谱柱：C₁₈ 180 mm×4.6 mm，10 μm；流动相：甲醇—水(85∶15)，流速：0.8 mL/min；柱温25 ℃，泵压8.41 MPa，检测波长278 nm。该条件下，氯霉素的理论塔板数为2100，t_R＝2.2 min。
3　标准曲线的绘制
精密称取氯霉素对照品适量，用上述流动相溶解成5、10、20、40、60、80 μg/mL的溶液，进样10 μL，色谱图见图1—a，以峰面积(Y)对浓度(X)回归，二者呈良好线性关系，回归方程为：
Y＝1.015×10⁵X+5.265×10⁴　r＝0.9999
4　回收率和干扰实验
精密称取氯霉素对照品约50 mg，置100 mL容量瓶，加水溶解并稀释至刻度，摇匀得对照品溶液。取已知含量的CG栓6份，每份1.0 g，分别精密称定，置100 mL容量瓶内，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取此液及对照品溶液各10 mL，混匀，滤过，取续滤液1.0 mL，用流动相精确稀释至10.0 mL，摇匀，进样10 μL，结果代入标准曲线计算。日内回收率为100.7 %±2.0 %(n=6)，日间回收率为100.2 %±2.6 %(n=6)。
　　另取空白栓约1.0 g，加水100 mL溶解，混匀，滤过，同上按“取续滤液1.0 mL”起操作，结果见色谱图1—b。经本法处理，栓剂中的其它成分不干扰氯霉素的测定。
5　样品测定和精密度实验
　　取CG栓样品4份，每份1.0 g，分别精密称定，置100 mL容量瓶内，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液1.0 mL，用流动相精确稀释至10.0 mL，摇匀，进样10 μL测定并代入标准曲线计算，色谱图见图1—c，测定结果见表1。
取上述1份样品测定液，重复操作，RSD为0.8 %(n=4)。

图1　对照品及样品色谱图
a.氯霉素对照品　b.空白栓液　c.CG栓样品
1.氯霉素　2.未知物

表1　样品测定结果(n=4)

样品批号

含量/%

RSD/%

950914

5.70

1.4

960113

5.75

1.3

960625

5.72

1.6

961021

5.71

1.1

6　讨论
氯霉素含量测定常采用紫外分光光度法或抗生素微生物测定法等^［1］。紫外分光光度法因复方制剂中干扰物质存在，分离提纯样品操作繁杂，误差较大；抗生素微生物测定法则由于CG栓中其它成分也有抗菌活性而不适用。本文采用HPLC法，样品处理简单，其它成分无干扰现象，结果准确、可靠，因此本法不失为一种控制CG栓中氯霉素含量的分析手段。

参考文献
1　　中国药典.1995.二部：971

(本文于1997年8月5日收到)