反相色谱法测定菲迪克止咳糖浆中多个成分的含量

反相色谱法测定菲迪克止咳糖浆中多个成分的含量

菲迪克止咳糖浆是香港联邦制药厂生产的复方制剂，其组分有磷酸可待因、盐酸吡咯吡胺、盐酸麻黄碱等。厂方提供的质量标准中，含量测定方法是由2个不同组分的流动相，用碳十八柱的高效液相色谱法，测定各组分。但由于该糖浆组分和辅料较为复杂，仍难以达到理想的分离效果。参考文献^［1］，本文提出反相高效液相色谱法对菲迪克止咳糖浆中的磷酸可待因、盐酸麻黄碱和盐酸吡咯吡胺进行一次性测定，取得满意效果。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪：岛津LC—10AD泵，岛津SPD—10A紫外检测器，岛津C—R6A数据处理机。
乙醇、醋酸铵均为分析纯。
样品及对照品均由香港联邦制药厂提供，磷酸可待因纯度为99.5 %，盐酸麻黄碱纯度为99.5 %，盐酸吡咯吡胺纯度为99.1 %。
2　色谱体系的建立
色谱柱：Spherisorb SiO₂(10 μm，250 mm×4.6 mm)，大连化物所。
参考文献^［2］，经过试验，考察流动相中各因素对磷酸可待因、盐酸麻黄碱、盐酸吡咯吡胺和其它成分峰的分离情况，优选流动相为醋酸铵溶液(醋酸铵1 g，加水适量溶解后，稀释至250 mL)—乙醇(3∶17)，流速1.5 mL/min，柱温为室温，检测波长为254 nm，分离满意。见图1(纸速为2 μm/min)。

图1　样品的色谱图
1.盐酸麻黄碱(6.56 min)　2.盐酸吡咯吡胺(9.56 min)
3.磷酸可待因(12.35 min)

3　线性范围
精密称取对照品盐酸麻黄碱约70 mg、盐酸吡咯吡胺约7 mg和磷酸可待因约50 mg，分别置50 mL量瓶中，用水溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为各标准贮备液。
分别量取各贮备液2.00、4.00、10.00、12.00、20.00 mL置50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，各取20 μL进样测定，结果盐酸麻黄碱在56～560 μg/mL范围内，盐酸吡咯吡胺在5.6～56 μg/mL范围内，磷酸可待因在40～400 μg/mL范围内，浓度(μg/mL)与色谱峰面积成线性关系，回归方程分别为：
Y＝3428.36+549.17X　r＝0.9999
Y＝115.022+31204.65X　r＝0.9999
Y＝-2682.61+4945.88X　r＝0.9999
4　回收试验
精密量取本品10.00 mL置50 mL量瓶中，精密加入盐酸麻黄碱、盐酸吡咯吡胺、磷酸可待因标准贮备液各5.0 mL，用水稀释至刻度，摇匀，取20 μL进样，按样品测定项下方法测定，5次测定结果回收率±RSD为：　盐酸麻黄碱99.9 %±0.81 %，盐酸吡咯吡胺　99.9 %±0.56 %、磷酸可待因99.8 %±0.75 %。
5　进样重现性和样品溶液稳定性
取同一样品溶液连续进样5次，考察测定结果的重现性，5次结果RSD为0.69 %，取样品溶液分别在0、1、5、8、10 h内测定，所得结果一致。
6　样品测定
6.1　对照溶液的配制　精密称取盐酸麻黄碱14 mg、盐酸吡咯吡胺1.4 mg和磷酸可待因10 mg，置50 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。
6.2　样品溶液的配制　精密量取本品10 mL置50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
6.3　测定　各取20 μL进样，测定，3批样品结果见表1。

表1　样品测定结果(标示量%)

批号

盐酸麻黄碱

盐酸吡咯吡胺

磷酸可待因

本法

厂方法^［3］

本法

厂方法^［3］

本法

厂方法^［3］

250596

99.3

99.5

99.1

99.0

97.3

97.0

051196

99.7

99.7

99.7

99.5

98.5

98.1

090896

98.9

99.2

99.3

99.5

98.6

98.2

7　小结
厂方提供的方法在磷酸可待因和盐酸麻黄碱的检测中，流动相内加入了离子对试剂和三乙胺，但分离效果不理想，重现性差，所得峰形对称性差，拖尾严重，且受pH影响大；另一组分盐酸吡咯吡胺的测定，其流动相pH为8.5，碱性较大，对碳十八柱易造成损坏，难获得满意的测定效果。本文采用反相流动相，硅胶柱同时测定3个组分，分离效果好(其分离度分别为盐酸麻黄碱与盐酸吡咯吡胺R＝5.7，盐酸吡咯吡胺与磷酸可待因R＝9.27)，所得各峰对称不拖尾，重现性好，可作为菲迪克止咳糖浆的含量测定方法。

参考文献
1　　林　梅.正相硅胶/反相洗脱系统在碱性药物分析中的应用.国外医学药学分册，1992，19(2)：102
2　　USP.ⅩⅩⅢ.1068
3　　香港联邦制药厂有限公司提供

(本文于1998年1月8日修改回)