毛细管区带电泳法测定复方马来酸依那普利片中两组分含量

(山东省药品检验所　济南　250012)

摘要　　用毛细管区带电泳法同时测定复方马来酸依那普利片中两组分含量。以咖啡因为内标，20 m mol/L硼砂—20 m mol/L磷酸二氢钠(4.9∶5.1，pH 8.6)为运行缓冲液，在7 min内完成分离。马来酸依那普利和氢氯噻嗪的线性范围分别为80～640 μg/mL(r=0.9999)和50～400 μg/mL(r=0.9993)。平均回收率分别为101.0 %和101.1 %，RSD分别为1.0 %和1.7 %,n=5。
关键词：毛细管区带电泳　马来酸依那普利　氯氯噻嗪
复方马来酸依那普利片具抗高血压作用，其主成分为马来酸依那普利和氢氯噻嗪。关于这两种组分含量的测定，已有UV导数光谱法^［1］和HPLC法^［1，2］。毛细管区带电泳(CZE)为新兴的分离分析技术，具有快速、高效、低耗、用样量少等优点。本文选用合适内标，首次试用CZE法测定了复方马来酸依那普利片中两组分含量。该法操作简单，结果准确。1　仪器与试药
Spectra PHORESIS 1000毛细管电泳仪(美国TSP公司)，15～60 ℃恒温装置，由PC 1000软件控制仪器操作及处理数据。石英毛细管(河北永年光纤厂)内径75 μm，总长75 cm，有效长度68 cm。
硼砂、磷酸二氢钠、氢氧化钠、乙腈皆为分析纯。马来酸依那普利及氢氯噻嗪对照品(纯度分别为99.5 %和99.6 %)、辅料、样品均由Q厂提供。咖啡因对照品由中国药品生物制品检定所提供。
2　实验条件
运?行?缓?冲?液?为?20? m? mol?/L?硼?砂?—?20? m mol/L磷酸二氢钠(4.9∶5.1，pH 8.6)，分　离　电　压　20.0　 kV，检　测　波　长　210 nm，柱　温　30 ℃，真　空　进　样1 s。每次开机后，依　次　用　1 mol/L氢　氧　化　钠　、0.1 mol/L氢氧化钠及蒸馏水各清洗毛细管5 min，2次实验之间用蒸馏水、缓冲液各清洗2 min，以获得好的重现性。
配制溶液及清洗所用蒸馏水均经Millipore Q纯水器再处理。
3　溶液配制
3.1　内标溶液　称取咖啡因适量，用缓冲液溶解并稀释至0.80 mg/mL。
3.2　对照品溶液　精密称取马来酸依那普利约20 mg和氢氯噻嗪约12.5 mg，置25 mL量瓶中，加乙腈5 mL使溶解，用缓冲液稀释至刻度。
4　线性范围
精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、8.0 mL于10 mL量瓶中，精密加入内标溶液1.0 mL，用缓冲液稀释至刻度，进样。分别以两组分与内标峰面积之比为纵坐标(Y)，以浓度为横坐标(X)，经回归处理，得马来酸依那普利、氢氯噻嗪的回归方程分别为：
Y＝0.00466X+0.001　r＝0.9999
Y＝0.00419X-0.010　r＝0.9993
可见，马来酸依那普利在80～640 μg/mL，氢氯噻嗪在50～400 μg/mL的浓度范围内线性关系良好。
5　回收率实验
精密称取马来酸依那普利约20 mg，氢氯噻嗪约12.5 mg，按处方比例投入辅料，置25 mL量瓶中，加乙腈5 mL超声助溶2 min，再加缓冲液稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液2.0 mL、对照品溶液2.0 mL，分别置10 mL量瓶中，各加入内标溶液1.0 mL，用缓冲液稀释至刻度，进样。马来酸依那普利和氢氯噻嗪的平均回收率(n=5)分别为101.0 %和101.1 %，RSD分别为1.0 %和1.7 %。
不加主药、内标，仅加入辅料按上述操作处理。结果无杂质电泳峰出现。
6　精密度实验
精密量取对照品溶液2.0 mL，加入内标溶液1.0 mL，置10 mL量瓶中，用缓冲液稀释至刻度，重复进样6次。计算马来酸依那普利和氢氯噻嗪与内标峰面积比值，RSD分别为1.6 %和1.2 %。
7　样品测定
取复方马来酸依那普利片20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于马来酸依那普利20 mg)，置25 mL量瓶中，按回收率实验项下处理样品。测定结果见表1，样品分离图谱见图1。由表1看出，本法与HPLC法^［2］测定结果基本一致。

表1　样品测定结果(标示量%，n=3)

批号

马来酸依那普利

氢氯噻嗪

本法

HPLC法

本法

HPLC法

950424

97.4(1.08)

98.5(1.20)

93.2(1.09)

94.8(1.24)

950425

98.9(1.57)

100.5(0.97)

96.3(1.15)

97.5(1.01)

950426

98.5(1.33)

99.9(1.38)

98.1(1.43)

101.1(0.89)

注：括号内为RSD(%)值

图1　样品电泳图谱
1.咖啡因　2.氢氯噻嗪　3.依那普利

8　讨论
8.1　实验证明缓冲液pH对分离影响很大。随pH增大，咖啡因和依那普利的迁移时间t_M减小，而氢氧噻嗪的t_M明显增大(见图2—A)。我们认为其原因是：咖啡因为中性物质，质子化依那普利的pKa₁＝2.97，pKa₂＝5.35^［3］，在pH 7.4～9.2范围内，二者的带电状态不随pH而改变，因此增加pH并不改变它们的电泳速度，只是使电渗速度增加，结果t_M减小。而氢氧噻嗪的pKa₁＝8.81，pKa₂＝10.4^［4］，随pH增加，带负电荷的分子数增加，电泳速度增大，且增大的程度超过电渗速度的增加，其总的迁移速度减小，t_M增加，当pH达9.2时，氢氯噻嗪已经在依那普利之后流出。由图2—A看出，pH为8.6时，3种物质的分离状况最好。
8.2　曾试验10、20、30、40、60 m mol/L等不同浓度的缓冲液。随缓冲液浓度增大，缓冲能力增加，但组分迁移时间延长(见图2—B)。本实验选用的工作缓冲浓度为20 m mol/L。

图2　迁移时间随缓冲液pH(A)及
缓冲液浓度(B)变化图
1.咖啡因　2.氢氯噻嗪　3.依那普利

8.3　马来酸依那普利在缓冲液中解离成依那普利与马来酸，图1中的峰3为依那普利的电泳峰，本文马来酸依那普利的含量以依那普利计算。
8.4　CZE内标法用于复方药物制剂的测定时，其精密度、准确度与HPLC相当，但柱效大大高于HPLC，本文中依那普利和氢氯噻嗪的理论板数分别高达180000和120000，CZE比HPLC更适于多组分样品的分析。与HPLC相比，CZE中样品液、缓冲液均消耗极少。且毛细管清洗十分简单，本文中马来酸在24.8 min时才出峰，在连续分析样品时，当两测定组分和内标流出后，即可停止电泳分离，分别用蒸馏水、缓冲液冲洗毛细管，一并除去样品中其它未流出成分，马来酸不会干扰下一次样品分析，这也是CZE优于HPLC的一个方面。

参考文献
1　　Carlucci G,et al.Simultaneous determination of enalapril maleate and hydrochlorothiazide in tablets by derivative UV spectrophotometry and high performance liquid chromatography.Int J Pharmaceutics,1993,93:245
2　　殷国真等.高效液相色谱法测定复方马来酸依那普利片中两组分含量.药物分析杂志，1996，16(4)：227
3　　Ip D P,et al.Analytical Profiles of Drug Substances.New York:Academic Press,vol.16.1987.207
4　　Deppeler H P.Analytical Profiles of Drug Substances.New York:Academic Press,vol.10.1981.405

(本文于1997年4月25日收到)

Determination of Two Constituents in Compound Enalapril

Maleate Tablets by Capillary Zone Electrophoresis

Chen Haifeng and Wang Jie
(Shandong Institute for Drug Control,Jinan,250012)

　　Abstract:A simultaneous determination of two constituents in enalapril maleate compound tablets by capillary zone electrophoresis was reported.With caffeine as internal standard and　 20 m mol/L borax —20 m mol/L 　NaH₂PO₄(4.9∶5.1，pH 8.6)as running buffer,the two constituents were separated within 7 minutes.The linear ranges of enalapril maleate and hydrochlorothiazide were 80～640 μg/mL(r=0.9999) and 50～400 μg/mL(r=0.9993),respectively.The average recoveries(n=5) were 101.0 % and 101.1 %，RSD were 1.0 % and 1.7 %,respectively.
　　Key words:capillary zone electrophoresis(CZE),enalapril maleate,hydrochlorothiazide