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摘 要 目的：为硝酸异山梨酯注射剂建立稳定性分析方法，并以此方法对其稳定性进行研究。方法：高效液相色谱法。结果：65，75和85℃加速试验30d或光照5d后，其外观无明显变化，pH值及含量不变。结论：本法简便、灵敏、可靠、重复性好。硝酸异山梨酯注射剂对热和光相当稳定，暂定有效期为2年。
关键词：硝酸异山梨酯 注射剂 稳定性 预测 高效液相色谱法
硝酸异山梨酯(ISDN，I)是目前抗心绞痛的常用药物之一。临床上广泛用于冠心病的长期治疗及心肌梗塞后的治疗［1，2］。目前国内只有片剂和胶囊剂，注射剂也试制成功。作者试用高效液相色谱法对I注射剂稳定性进行了研究，报告如下。
1 仪器和试药
1.1 仪器
Waters 204高效液相色谱仪、Waters 703积分仪、Waters 404检测器(日本)。
1.2 试药
I标准品(山东医药工业研究所)；I注射剂(山东医科大学药剂教研室，规格为5ml安瓿);5-硝酸异山梨酯(5-ISMN)及2-硝酸异山梨酯(2-ISMN)标准品(山东医药工业研究所)；其它试剂均为市售分析纯。
2 实验方法
2.1 色谱条件
固定相为Nucleosil RpC18色谱柱(250×4mm);流动相为50%甲醇水(v/v)溶液；流速为0.8ml/min;检测波长为254nm;灵敏度为0.02AUFS;室温测定。在此色谱条件下，完成了ISDN及其降解产物2-ISMN和5-ISMN的分离，色谱分离图见图1。由图1可知，在此色谱条件下,ISDN和其降解产物2-ISMN和5-ISMN可完全分离。
图1 色谱图
1-ISDN，tR1=7.33min;2-caffeine(IS),tR2=4.07min;3-5-ISMN,tR3=3.50min;4-2-ISMN,tR4=3.15min
2.2 标准曲线绘制
精密称取咖啡因100mg,用流动相溶解并定容至100ml,从中精密吸取10.00ml于100ml量瓶中，以流动相定容，配成含咖啡因0.1mg/ml的内标液备用。精密称取I标准品100mg,用流动相定容至100ml,得1mg/ml的储备液备用。
分别吸取1储备液2.50,3.75,5.00,6.25,7.50和8.75ml置6个25ml量瓶中。同时分别加入内标液3.75ml,加流动相定容，配制成浓度为100,150,200,250,300和350μg/ml的I标准系列，其中内标浓度均为15μg/ml,室温进样10μl,每种浓度进样3次，以峰面积比对浓度回归得回归方程：Y=-0.0446+4.63×10-3c,r=0.9999。
2.3 I注射剂的含量测定
精密吸取I注射剂2.00ml置10ml量瓶中，精密加入1.5ml内标液，加流动相至刻度，摇匀。取10μl进样，将峰面积比Y代入回归方程求出含量。平均回收率为100.2%(RSD=0.25%,n=6)。
以下稳定性试验中，所有含量测定结果均采用该法得出。
2.4 I注射剂稳定性实验
2.4.1 热稳定性实验：采用恒温加速试验法，将I注射剂分别置65,75和85℃恒温水浴中保温，间隔一定时间取样，测定含量和pH值，结果见表1。色谱图未见ISDN降解产物2-ISMN和5-ISMN的吸收峰，表明I注射剂加热没有降解产物产生。
2.4.2 I注射剂的光稳定性实验：将I注射剂置日光下照射5d,或以2 500lx的光线照射10d,间隔一定时间取样，测定含量和pH值，结果见表2。色谱图未出现其降解产物的吸收峰，表明I注射剂在光照下没有降解产物产生。
表1 I注射剂热稳定性实验(n=3)
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温度(℃)
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取样间隔时间(d)
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含量(%)
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pH值
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65
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0
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99.23
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7.35
|
|
|
6
|
99.47
|
7.35
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12
|
99.05
|
7.35
|
|
|
18
|
99.61
|
7.35
|
|
|
24
|
99.32
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7.35
|
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75
|
0
|
99.23
|
7.35
|
|
|
5
|
99.58
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7.35
|
|
|
10
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99.35
|
7.35
|
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|
15
|
99.17
|
7.34
|
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20
|
99.54
|
7.34
|
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85
|
0
|
99.23
|
7.35
|
|
|
3
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99.12
|
7.35
|
|
|
6
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99.54
|
7.35
|
|
|
10
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99.37
|
7.35
|
|
|
20
|
99.23
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7.34
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30
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99.35
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7.34
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表2 I注射剂光稳定性实验(n=3)
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时间(d)
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含量(%)
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pH值
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0
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100.5
|
7.35
|
|
1
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100.6
|
7.35
|
|
3
|
99.84
|
7.35
|
|
5
|
99.95
|
7.35
|
|
10
|
100.2
|
7.35
|
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5(日光)
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100.8
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7.35
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3 讨 论
由2.4可知，I注射剂于85℃保温30d，或以强列日光照射5d，或以2 500lx光线照射10d，其含量无明显变化，且未出现其降解产物5-ISMN和2-ISMN的吸收峰。色谱图见图2。故认为I注射剂对光和热相当稳定。
图2 色谱图
1-ISDN，tR1=7.33min;2-caffeine(IS),tR2=4.07min
根据新药评审要求，将I注射剂置室温留样观察2年(3个批号)后，测定含量和pH值，结果均无明显变化，故暂定有效期为2年。
作者单位：济南 250012 山东医科大学药学院
参考文献
［1］戴德银，王曾礼，徐国利，等.实用新药特药手册.北京：人民军医出版社，1994∶595.
［2］陈新谦，金有豫.新编药物学.第12版.北京：人民卫生出版社，1985∶323.
中国现代应用药学1999年第16卷第4期
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