摘要 目的:建立用HPLC法测定辛伐他汀及其片剂含量的方法。方法:采用Alltima ODS柱(250 mm×4.6 mm),于238
nm下检测,流动相乙腈-0.1%磷酸(60∶30)。结果:线性范围0.5~5 μg(r=0.9998),最低检测限为0.3
ng,平均回收率为99.1%,RSD为0.82%。结论:方法重现性好,准确度高,适于制剂含量测定及稳定性研究。 关键词 辛伐他汀;高效液相色谱法 中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:1006-0103(2000)03-0205-02
辛伐他汀(simvastatin)为无活性内酯,经口服吸收后水解为相应的β-羟酸结构,对HMG-CoA还原酶有抑制作用,可降低肝脏胆固醇的合成及调节低密度脂蛋白受体、促进低密度脂蛋白清除而降低细胞内胆固醇水平[1]。临床用于治疗高胆固醇血症,冠心病,可明显降低高脂血症患者血浆中的甘油三酯,提高高密度脂蛋白水平。目前除默沙东的舒降之外,国内尚无制剂生产,亦无含量测定的报道。
1 实验部分
1.1 仪器与试药 岛津LC-6A型高效液相色谱仪配岛津SPD-6AV型紫外检测器、岛津C-R6A数据处理仪及WDL-95色谱工作站(中国科学院大连化学物理研究所);美国Orion
Research
EA-940型离子分析仪;岛津UV-2201型紫外分光光度计。乙腈(色谱纯,浙江黄岩化工试验厂);磷酸(分析纯,北京化工厂);冰醋酸,氢氧化钠(分析纯,北京化工厂);蒸馏水(药用,自制)。辛伐他汀原料(批号970104、970114、970118),片剂(批号970308、970309、970310)(广东彼迪药业有限公司);辛伐他汀对照品(批号53776-D,美国默沙东公司);洛伐他汀对照品(批号970114,含量99.86%,北京市药品检验所)。 1.2 色谱条件 美国Alltima
ODS柱(5μm,250 mm×4.6 mm),检测波长238 nm,AUF 0.02,流动相乙腈-0.1%磷酸(60∶30)用0.45
μm微孔滤膜过滤并脱气,流速1.5
ml.min-1。 1.3 溶液的制备 取蒸馏水900
ml,加冰醋酸30 ml,用20%氢氧化钠溶液调节pH4.0,加水至足量,搅匀即得醋酸-醋酸钠缓冲液;取800 ml乙腈,加醋酸-醋酸钠缓冲液200
ml,搅匀即得溶解液;精取干燥至恒重的辛伐他汀对照品62.5 mg,在50
ml量瓶中用溶解液稀释至刻度,配成1.25mg.ml-1的辛伐他汀标准溶液,冷藏备用;精取干燥至恒重的洛伐他汀对照品25.05
mg,在50 ml量瓶中用溶解液稀释至刻度,制成0.501
mg.ml-1的洛伐他汀标准溶液,冷藏备用。精取样品(片剂20片研细)相当于辛伐他汀40
mg,在50 ml量瓶中加溶解液(片剂超声30分钟)稀释至刻度,精密吸取续滤液5 ml,在25
ml量瓶中加溶解液稀释至刻度,即得样品溶液。 1.4 线性关系 精取辛伐他汀标准溶液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0
ml,分别置25 ml量瓶中,用溶解液定容,进样20
μl,取两次均值,以进样量为X,峰面积为Y进行线性回归,得回归方程Y=6334.0+371798.9X,r=0.9998,线性范围0.5~5μg。 1.5 方法考察 1.5.1 最小检出限 调节灵敏度为0.002,信噪比为2时,最小检出量为0.3
ng。 1.5.2 精密度 分别用50
μg.ml-1标准溶液进样20 μl及样品溶液进样10 μl,每隔1
h进样1次共5次,日内RSD为0.62%与1.06%,每24
h进样1次共5次,日间RSD为1.19%与1.47%。 1.5.3 回收率 精取干燥至恒重的辛伐他汀对照品20
mg,共6份,按处方比例分别加入辅料,在100 ml量瓶中用溶解液定容,取续滤液10 ml,在25 ml量瓶中用溶解液定容,摇匀,进样20
μl,以辛伐他汀80μg.ml-1的标准溶液为外标,结果为99.8%、99.6%、100.2%、98.7%、98.1%、98.4%,平均回收率为99.1%,RSD为0.82%。 1.5.4 色谱柱柱效、分离度及拖尾因子 用溶解液将辛伐他汀标准液稀释为80
μg.ml-1和洛伐他汀标准液50
μg.ml-1,进样20
μl,记录色谱图(图1),计算分离度为R=6.1,拖尾因子T=1.24,理论板数为10230。 |
![](http://www.39kf.com/uploadfiles/image/14915/TXT-200751871653817.gif)
图1 辛伐他汀与洛伐他汀的色谱图 Fig 1
Chromatogram of Simvastatin and Lomvastatin mixture 1 Blank(溶剂) 2
Simvastatin(辛伐他汀) 3 Lovastatin(洛伐他汀)
1.6 样品的含量测定 将原料及片剂的样品溶液,进样10
μl,进样5次取平均值,结果以标示量的百分数表示(表1)。
表1 原料及片剂样品的含量结果(n=5) Table 1
Samples assay results(n=5) |
Sample |
No. |
x/% |
RSD/% |
Material |
970104 |
98.84 |
0.97 |
970114 |
98.76 |
0.53 |
970118 |
99.08 |
0.64 |
Tablet |
970308 |
96.17 |
1.40 |
970309 |
97.58 |
1.47 |
970310 |
98.19 |
0.31 |
2 讨论
2.1 片剂样品和辅料用紫外分光光度计扫描,样品在231、238、247
nm有吸收峰,辅料无吸收,选最大吸收波长238 nm作检测波长,扫描曲线见图2。
![](http://www.39kf.com/uploadfiles/image/14915/TXT-200751871653748.gif)
图2 辛伐他汀片的紫外扫描图 Fig 2 Ultraviolet
spectrum of Simvastatin tablets
2.2 样品中存在洛伐他汀,参照美国药典[2]所收载的辛伐他汀含量测定项,本试验采用的流动相较美国药典比例略有调整,由60∶40变成60∶30,减少了水的用量,使保留时间缩短,适于快速分析。其理论板数(N)大于2000,与洛伐他汀的分离度大于3,拖尾因子不大于2,符合美国药典的要求。 2.3 辛伐他汀片剂分别采用溶解液、乙腈、流动液作为溶解介质,超声30分钟提取,含量分别为98.2%±0.94%、95.3%±1.43%、69.7%±5.45%(n=3),以采用乙腈和醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.0)配成的溶解液提取效果最好。
作者简介:闫小燕,女,学士,主管药师,从事医院药学工作。 闫小燕(卫生部北京医院药剂科,北京100730) 曹国颖(卫生部北京医院药剂科,北京100730) 何笑蓉(卫生部北京医院药剂科,北京100730) 胡欣(济南市千佛山医院,山东
济南250000) 谷大建(济南市千佛山医院,山东 济南250000)
参考文献
1,Scandinavian Simvastatin
Survival Study Group. Randomised trial of cholesterol lowering in 4444
patients with Coronary heart disease :the Scandinavian Simvastatin
Survival Study(4S)[J].Lancet,1994,344:1383 2,USP.NF (Ⅲ)[S].1995.
2979
收稿日期:1999-11 |
作者:
闫小燕曹国颖何笑蓉胡欣谷大建 2007-5-18