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| 以大蒜头为原料经一系列工艺过程加工而制得的大蒜油产品，已广泛应用于医药、保健及食品工业领域［1］，大蒜油中大蒜素的定量分析方法已有一些报道［2～4］。近年来，用人工合成大蒜素制成具有抗菌消炎作用的饲料添加剂已用于饲料生产中，而有关饲料添加剂中人工合成大蒜素的定量分析方法未见报道。本文在文献报道的基础上，进一步研究了用毛细管气相色谱法测定大蒜素的色谱条件，样品中大蒜素的提取方法、提取溶剂、溶剂用量、提取时间等诸因素的影响，提出了一个实际可行的分析方法。 1 实验部分1.1 试剂 1.1.1 1%苯乙酮丙酮溶液，取1.00 ml苯乙酮于100 ml容量瓶中，用丙酮定容至刻度。 1.1.2 1%大蒜素丙酮溶液，称1.0000 g大蒜素标准品(广州新技术应用所提供)，用丙酮溶解，定量移入100 ml容量瓶中，用丙酮定溶至刻度。 本实验所用试剂除特别说明外，均为分析纯。 1.2 仪器及设备 1.2.1 GC—16A 气相色谱仪(日本鸟津) 1.2.2 C—R3A记录仪(日本鸟津) 1.2.3 FID检测器 1.3 实验方法 1.3.1 毛细管气相色谱分析条件 PEG(25 m×0.32 mm)毛细管柱，程序升温140℃→180℃，升温速率10℃/min，FID检测器250℃，高纯氮载气50 ml/min,分流30∶1，尾吹25 ml/min,进样量1 μl,定量方法：内标标准曲线法，内标：苯乙酮。 1.3.2 标准曲线绘制 准确移取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml 1%大蒜素丙酮溶液，加0.2 ml 1%苯乙酮丙酮溶液，加丙酮至10.0 ml，摇匀。按气相色谱条件进样分析，绘制大蒜素峰高(hi)/苯乙酮峰高(hs)—浓度曲线。 1.3.3 样品测定 称取大蒜素试样1.0000 g于磨口三角锥瓶中，加10.0 ml丙酮，摇匀，放置过夜，吸取上层清液6.0 ml，以下测定同标准曲线绘制，测定 hi/hs，计算试样中大蒜素的含量。 2 结果与讨论 2.1 色谱定性分析 按实验方法，大蒜素及内标物与样品中其他组分达到完全分离，峰形对称，稳定性好。 2.2 提取方法及提取溶剂的选择 我们用不同溶剂对照了索氏提取法和浸泡法对大蒜素提取量的影响，结果见表1。 表1 提取方法及提取溶剂的选择 |
| 溶 剂 | 正己烷 | 乙醇 | 甲醇 | 丙酮 | |
| 大蒜素峰面积 | 索氏提取法 浸泡法 |
6.6×104 6.7×104 |
7.3×104 7.0×104 |
浑浊 5.2×104 |
7.0×104 6.9×104 |
| (μV.s.ml).g－1 |
| 由表1可知，两种提取方法测得的峰面积相差不大。用甲醇作溶剂时，采用索氏提取法提取液变浑浊，用丙酮、乙醇、正己烷作溶剂，提取效率相当，但用乙醇作溶剂时，色谱峰拖尾较严重，故我们实验中采取浸泡法用丙酮作提取溶剂。 2.3 溶剂用量的影响 在等量的试样中，分别加入5.0，10.0，15.0，20.0，30.0 ml的丙酮，按样品测定方法测定大蒜素峰高。结果表明，溶剂用量在5.0～30.0 ml中，大蒜素提取量相当，如表2所示，我们在实验中取10.0 ml。 表2 溶剂用量的影响 |
| 丙酮/ml | 5.0 | 10.0 | 15.0 | 20.0 | 30.0 |
| 大蒜素峰高/cm | 11.9 | 12.0 | 12.0 | 11.8 | 11.9 |
| 2.4 浸泡时间的影响 按样品测定方法分别浸泡1，2，4，6，8，10，12，18，24 h，测定大蒜素的峰面积。结果表明，随着浸泡时间的增加，峰面积逐渐增大，浸泡8 h后，峰面积不再随浸泡时间的增长而增加，如表3所示。为操作方便，我们在实验中浸泡过夜。 表3 浸泡时间的影响 |
| 时间 | 1 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 18 | 24 |
| h | |||||||||
| 峰面积×104 | 2.6 | 3.6 | 5.0 | 6.5 | 6.9 | 7.0 | 7.0 | 7.0 | 7.0 |
| (μV.s.ml).g－1 |
| 2.5 线性范围 按标准曲线绘制方法测定，大蒜素在0～1.2 mg/ml范围内呈线性关系，相关系数r=0.996。 2.6 样品测定 按实验方法测定了某单位生产的饲料添加剂大蒜素样品，相对标准偏差为2.5%，平均回收率为95.5%，结果如表4所示。 表4 样品的测定(n=6) |
| 试样量 | 测定量 | 加入标准量 | 回收率 | 相对标准偏差 |
| g | % | mg | % | % |
| 1.0000 | 0.8 | 0.4 | 95.5 | 2.5 |
| 本文的研究借鉴了前人的研究成果，应用于饲料添加剂中，本文报道的毛细管色谱条件及样品处理条件对饲料添加剂大蒜素的质量品定具有实际意义。作者单位：广东工业大学化工系(510090)、华南师范大学实验中心(510631)、广东省农科院畜牧研究所(510640)
参考文献 1 陈光伟*大蒜油主要营养成分的气相色谱与色谱—质谱联用分析。分析化学，1997，25(1)：1327～1330 (收稿日期：1998-08-30) |