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石明止血合剂是由石榴皮、五倍子、明矾等制成的中药制剂，具有止血、固涩、收敛之功效，用于各种原因所致的上、下消化道出血，如消化道溃疡，出血性胃炎等病症。方中石榴皮、五倍子的主要有效成分都是没食子酸。本品原质量标准为采用紫外分光光度法测定没食子酸的含量,没食子酸的含量测定文献报道还有高效液相色谱法。本实验采用毛细管区带电泳(capillary zone electrophoresis，CZE)法测定石明止血合剂中没食子酸的含量，操作简便，样品分离完全，结果准确可靠。
1 仪器与试药
HPCE 毛细管电泳仪(Agilent公司，美国)，DAD检测器，HPCD化学工作站。熔融石英毛细管柱(河北省永年光导纤维厂生产)。
石明止血合剂由解放军第454医院制剂室提供(批号为020501，020601，020602)。没食子酸(批号为0831—9501)、绿原酸(批号为0753—2001l1)对照品均由中国药品生物制品检定所提供。试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。
2 方法与结果
2．1 电泳条件：毛细管柱：未涂层毛细管(48cm×50μm，有效长度40cm)；缓冲液：25mmol／L硼砂(pH 9.68)；分离电压：30kV；检测波长：214nm；温度：25℃ ；进样条件：5kPa，3.0s.每天分析之前，用0.5mol／L氢氧化钠溶液冲洗毛细管15min。超纯水冲洗3min。运行缓冲液冲洗10min。进样前分别用0.5 mol／L氢氧化钠溶液运行缓冲液冲洗5min。
2．2 标准曲线和线性范围：分别取没食子酸对照品和内标绿原酸适量，用乙醇溶解，定容，分别制得0.5 mg／mL对照品溶液及1mg／mL内标溶液。分别取对照品溶液0.25，0.5，0.75，1.0，2.0，2.5mL置5mL量瓶中，各加内标溶液1.0mL，用乙醇稀释至刻度，按选定的电泳条件测定，以没食子酸峰面积与内标峰面积的比值(Y)对没食子酸对照品的浓度(X)作回归曲线，得标准曲线方程Y=一0.2103+0.0281X，r= 0.9997。线性范围为25～250μg／mL。
2．3 精密度试验：在选定的测定条件下，将含有内标的没食子酸对照品溶液连续进样6次，结果峰面积比值的RSD=1.1%。
2．4 重现性试验：取同批号供试品(020601)按2．7项下方法制备溶液，重复测定各样品5次，测得石明止血合剂中没食子酸平均含量为33.44 mg／mL，RSD=2.8%。
2．5 稳定性试验：取同一份供试品溶液，每隔1h进样一次，测定其没食子酸含量，结果，供试液在6h内所测结果一致，没食子酸含量RSD=1.3%。
2．6 回收率考察：采用加样回收法。按2．7项下方法精密吸取石明止血合剂(020601)3份，每份2.5mL，分别加入74mg没食子酸对照品，继续按2．4项下的方法操作，求得没食子酸平均回收率为96.75%，RSD=2.5%，(n=6)。
2．7 样品溶液的配制和测定：精密吸取石明止血合剂5.0mL，加盐酸0.5mL，于水浴中微沸水解1h，冷却后用乙醚20mL，分10，5，5mL3次萃取，合并萃取液置蒸发皿中，蒸干，用乙醇定容至25mL量瓶中。精密吸取1mL置5mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取1mL上述溶液和1mL内标置5mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。按选定的方法，测定石明止血合剂中没食子酸含量。
3 讨论
3．1 最低检测限：以信噪比等于3：1为标准，测定没食子酸的最小检测浓度为1μg／mL。
3．2 运行缓冲液的pH 对分离效果的影响：在25mmol／L硼砂缓冲液(pH=9.68)中添加不同浓度的氢氧化钠溶液(相应pH 分别为10.52，12.24)。结果表明，pH 为9.68时的分离效果最佳。
3．3 检测波长的选择：在实验中，对没食子酸对照品溶液在200～600nm进行光谱扫描。结果没食子酸在214nm处吸收值最大，灵敏度最高，故选择其为测定波长。
3．4 空白试验：按处方比例制备不含石榴皮、五倍子药材的阴性对照溶液，按样品含量测定方法操作，结果空白溶液在与没食子酸对照品相同保留时间处，未显示明显色谱峰，认为无干扰。
References：
[1]Ch P (中国药典)[S]．2000 ed．Vol I．
[2] Bian A F，Chang Y P，Jin R L．Determination of gallic acid in Shiming Zhixue Mistura[J]．China J Chin Mater Med(中国中药杂志)，1994，19(5)：287—289．
来源：东方医药网