高效毛细管电泳法测定注射用盐酸头孢吡肟的含量

 
    摘要： 目的 测定注射用盐酸头孢吡肟的含量。方法 高效毛细管电泳法。毛细管60cm×75μm；运行缓冲液30mmol／l硼砂(pH9.2)，高压进样5s，分离电压l2kV，温度为25℃．检测波长为254nm．地塞米松磷酸钠为内标。结果 头孢毗肟在6～30μg／ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9998)，平均回收率为98.97%。结论：本法简单、快捷、灵敏。
    关键词：头孢吡肟；高效毛细管电泳法；含量测定
    注射用盐酸头孢吡肟(cefepime dihydrochloride)是最新推出的第四代头孢菌素类药物，抗菌谱广，对大多数革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌均有效，特别能耐受多数 内酰胺酶的水解，因而越来越广泛被应用于临床。目前国外有HPLC测定头孢毗肟含量的报道。高效毛细管电泳(HPCE)是近年来发展迅速的一种新的分离分析技术。与传统的分离分析手段相比较，具有高效、快速、微量和易于自动化等优势。HPCE分析抗生素的研究正引起人们的关注。高效毛细管电泳测定头孢吡肟的含量还未见报道。本文首次采用HPCE法测定了注射用盐酸头孢吡肟的含量，结果表明该法简单易行，快速、灵敏、准确。
    1 仪器与试药
    高效毛细管电泳仪和石英毛细管柱(60cm×75μm)均为Waters公司产品。
Millennium32数据处理系统；头孢吡肟对照品(含量为96.3%，Bristol-Myers Squibb公司提供)；地塞米松磷酸钠对照品(Sigma公司提供)；注射用盐酸头孢吡肟(1.0g，相当于头孢吡肟1g，含量为62%，批号：0304523，0307576，0308796，Bristol-Myers Squibb公司提供)；硼砂、氢氧化钠均为分析纯。
    2 方法与结果
    2．1 运行缓冲液的配制
    精密称取5.73g硼砂溶于500ml超纯水中，配成30mmol／L硼砂电泳缓冲液溶液，0.1mol／L盐酸调pH值为9.2。
    2．2 电泳操作条件
    分离电压：12kV；检测波长：254nm；采用压力进样，进样压力为50kPa，进样时间为5s；缓冲液：30mmol／L硼砂溶液(pH9.2)。每次进样前用运行电泳缓冲液冲洗毛细管柱lOmin，每次分析后用0.1mol／L，的氢氧化钠冲洗2min，水冲洗10min。所用溶液均经0.45μm纤维树脂膜过滤。上述电泳条件，得电泳图。
    2．3 对照品溶液和内标溶液的配制
    精密称取头孢吡肟对照品15.0mg，置于lOOml容量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀，配成浓度为0.15mg／ml的头孢吡肟对照品溶液。精密称取地塞米松磷酸钠对照品15.0mg置于lOOml容量瓶中，加超纯水至刻度，摇匀，配成0.15mg／ml的地塞米松磷酸钠内标溶液。
    2．4 线性关系考察
    精密吸取头孢吡肟对照品溶液1、2、3、4和5ml置于25ml容量瓶中，分别加内标溶液2ml，用超纯水稀释至刻度，摇匀，按上述电泳条件，分别进样，以头孢吡肟对照品浓度(μg／m1)为横坐标(C)，头孢吡肟主峰面积与内标峰面积比为纵坐标(A)作图，回归方程为：A=0.0831C一0.0036，r=0.9998(n=5)，头孢吡肟在6～30μg／ml浓度范围内线性关系良好。
    2．5 精密度试验
    精密吸取头孢吡肟对照品溶液2ml置25ml容量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀，按上述电泳条件进样，重复进样5次．测得头孢吡肟含量的RSD为1.76，表明仪器精密度良好。
    2．6 稳定性试验
    在相同电泳条件下将同一对照品溶液分别于0、1、2、4、6、8h重复进样，测得头孢吡肟含量的RSD为1.86％，表明头孢吡肟在8h内测定结果稳定。
    2．7 重复性试验
按样品测定项下方法，对同一批号样品分别取样平行测定5次，求得含量的相对标准偏差RSD为1.73％，表明重复性较好。
    2．8 加样回收试验
    精密称取已测知含量的注射用盐酸头孢吡肟约30mg(约相当于头孢吡肟20mg)置100ml容量瓶中，加超纯水溶解稀释至刻度，摇匀。精密吸取该溶液lml置25ml容量瓶中，加入内标溶液2ml，再加入头孢吡肟对照品(0.15mg／m1)溶液1.0ml，用超纯水稀释至刻度，摇匀，进样，以头孢吡肟对照品峰面积与内标峰面积比代入回归方程计算回收率。平均回收率为98.97％。
    2．9 样品测定
    取注射用盐酸头孢吡肟3批，精密称取适量置100ml容量瓶中，加超纯水适量溶解稀释至刻度，摇匀。精密吸取该溶液2ml置25ml容量瓶中，加入内标溶液2ml，用超纯水稀释至刻度，摇匀．进样，内标法计算3批样品的含量。3批样品的标示量分别为99.6%、99.5%、99.2%。
    3 讨论
    本实验曾比较磷酸盐、硼酸-硼砂、硼砂等三种缓冲液，发现硼砂对头孢吡肟的分离最理想；缓冲液浓度和pH 值对分离具有重要影响，高浓度缓冲液可获得较好的分离，但保留时间会变长，而且导致通过毛细管的砘流增加，从而增大焦耳热。因此，我们选用30mmol／L硼砂作缓冲液。pH值选择是决定分离成败的一大关键。采用pH为9.2的硼砂缓冲液时分析时间短，峰形尖锐、对称并达到基线分离。
研究表明，柱温降低分离度变好，但柱效减低，分析时间变长。综合考虑分离度和迁移行为的变化，本实验选用25℃柱温较合适。分离电压是毛细管电泳的一项重要参数，实验表明，增加组分的迁移速度是减少谱带展宽、提高分离效率的重要途径，增加电场强度可以达到提高速度的目的。但高场强度导致通过毛细管的电流增加，从而增大焦耳热。在12kV时，分离选择性最佳。
首次利用高效毛细管电泳法测定注射用盐酸头孢吡肟的含量，方法简便、准确、快速、重复性好，可为注射用盐酸头孢吡肟的质量控制提供一种便利的方法。

参考文献
    [1]Ip M．Au C，Cheung S W ．et a1．A rapid high-performance liquid chromatographic assay for cefepime
，cefpirome and meropenem [J]．J Antimicrob Chemother，1998，42(1)：1 21

来源：东方医药网